第２９卷第２期 ２００８年３月 武汉大学学报（医学版） Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｖ０１．２９ Ｎｏ．２ Ｍａｒ，２００８ 普伐他汀抑制Ｃ一反应蛋白诱 导的ＨＵＶＥＣ ＩＬ一６ 细胞合成ＴＮＦ一 和 王海蓉 熊世熙 黄从新。 武汉大学中南医院心内科湖北武汉４３００７１ ４３００６０ 。武汉大学人民医院心内科 湖北 武汉摘要 目的：观察ｃ＿反应蛋白（ＣＲＰ）刺激对人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ）分泌功能的影响。方法：体外 培养ＨＵＶＥＣｓ，检测细胞对ＣＲＰ诱导的反应以及普伐他汀于预效应。酶联免疫吸附试验检测培养液上清中肿瘤 坏死因子ａ（ＴＮＦ－ａ）和白介素－６（ＩＩ，６）的水平。电泳漂流技术（ＥＭｓＡ）检测细胞核提取物中ＮＦ－ｘＢ与ＤＮＡ的结合 活性。结果：ＴＮＦ＿ａ和ＩＬ－６的水平随ＣＲＰ刺激浓度的升高而增加，呈剂量依赖性（０－１００ ｍｇ／Ｌ），在５ ｍｇ／Ｌ ＣＲＰ 时即可检测到ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－６表达，１００ ｍｇ／Ｌ ＣＲＰ时可见最大效应。５０ ｍｇ／Ｌ ＣＲＰ呈时间依赖性增加ＴＮＦ．ａ和 ＩＬ－６的表达（Ｏ－４８ ｈ），２４ ｈ达高峰。普伐他汀有效抑制ＣＲＰ诱导的ＮＦ－ｘＢ激活和炎症因子表达。结论：ＣＲＰ剂量 依赖性激活血管内皮细胞的炎症因子表达，其中ＮＦ－ｘＢ途径被激活，参与致动脉粥样硬化作用；他汀类药物能有效 抑制该途径，发挥抗炎及抗动脉粥样硬化作用。 关键词 ｃ＿反应蛋白；血管内皮细胞；细胞因子；普伐他汀；动脉粥样硬化 中图分类号 Ｒ５４３．３ １ 文献标识码 Ａ 文章编号 １６７１－８８５２（２００８）０２－０１９８—０４ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ ｏｎ ｔｈｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ＴＮＦ—Ａｌｐｈａ ａｎｄ ＩＬ＿＿６ ｂｙ ＨＵＶＥＣｓ Ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｂｙ Ｃ＿＿Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＷＡＮＧ Ｈａｉｒｏｎｇ ，ＸＩＯＮＧ Ｓｈｉｘｉ ，ＨＵＡＮＧ Ｃｏｎｇｘｉｎ。 Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｚｈｏｎｇｎａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００７１，Ｃｈｉｎａ 。Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｎｍｉｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００６０，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｃ—ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａ１ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｔａｔｉｎ ｏｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒａ （ＴＮＦ－ａ）ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６（ＩＬ一６）ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＣＲＰ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏ— ｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ＨＵＶＥＣｓ）ｔｏ ＣＲＰ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃ— ｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）．Ｆｕｒｔｈｅｒ ｗｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｗｈｅｔｈｅｒ ｔｈｅ ｒｅｄｏｘ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＮＦ－ｋａｐ— ｐａＢ（ＮＦ—ＫＢ）ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ＨＵＶＥＣｓ ｂｖ ＣＲＰ．Ａｔ １ａｓｔ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＣＲＰ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ＴＮＦ－ａ ａｎｄ ＩＬ一６ ａｓ ｗｅｌ１ ａｓ ＬＰＳ ｄｉｄ ｉｎ ＨＵＶＥＣｓ．Ｉｎ ＨＵＶＥＣｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ—ａ ａｎｄ ＩＬ一６ ｗａｓ ａｌｒｅａｄｙ ｐｒｅｓ— ｅｎｔｅｄ ａｔ ５ ｍｇ／Ｌ ａｎｄ ｒｅａｃｈｅｄ ａ ｍａｘｉｍｕｍ ａｔ １００ ｍｇ／Ｌ ｏｆ ＣＲＰ，ａｔ ｗｈｉｃｈ ｐｏｉｎｔ ａ ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ ｉｎ— ｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ—ａ ａｎｄ ＩＬ一６ ｗｅｒｅ ｅｖｉｄｅｎｔ．Ｔｈｅ ＣＲＰ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｔｉｍｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ（０－４ ８ ｈ）ａｎｄ ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ（０—１００ ｍｇ／Ｌ）．ＣＲＰ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦ—ＫＢ ｉｎ ＨＵＶＥＣｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｃ— ｔｉｖａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＣＲＰ ｃａｕｓｅｓ ＮＦ＿ＫＢ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈ ＵＶＥＣｓ 作者简介：王海蓉，女，１９７２一，医学博士，主治医师，主要从事冠心病基础研究 通讯作者：熊世熙，男，１９５７一，主任医师，主要从事心肌保护方面的研究 维普资讯 http://www.cqvip.com
第２期 王海蓉，等．普伐他汀抑制ｃ－反应蛋白诱导的ＨＵＶＥＣ细胞合成ＴＮＦ－￣和ＩＬ－６ １９９ ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ Ｉｅａｄ ｔＯ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＴＮＦ—ａ ａｎｄ ＩＬ一６ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ＬＰＳ ｄｏｅｓ．Ｔｈｉｓ ｅｆｆｅｃｔ ｃａｎ ｂｅ ｉｎ— ｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ．ＣＲＰ ｍａｙ ｐｌａｙ ａ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｔ ｌｅａｓｔ ｉｎ ｐａｒｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ＮＦ—ＫＢ ａｎｄ ｓｔａｔｉｎｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｉｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｐｒｏｖｉｄｅ ａｎ ｉｎｓｉｇｈｔ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｏｒ ａｎｔｉ—ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｔａｔｉｎｓ． Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ Ｃ—Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ，Ｖａｓｃｕｌａｒ；Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ；Ｓｔａｔｉｎｓ；Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏ— ＳｉＳ 炎症在动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＡＳ）的发 先用普伐他汀孵育２ ｈ，再用ＣＲＰ刺激２４ ｈ，提取细胞 生发展阶段发挥着重要作用ｌ１］。流行病学研究提示 Ｃ一反应蛋白（Ｃ—ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＲＰ）是ＡＳ的重要 风险预测因子ｌ２。］，高水平ＣＲＰ预示ＡＳ病人预后 较差。体外实验ｌ４ 证实，ＣＲＰ可能直接参与ＡＳ的 形成过程。如ＣＲＰ直接诱导血管内皮细胞表达各 种黏附分子与趋化因子，促进血管内皮细胞功能紊 乱。但有关ＣＲＰ对血管内皮细胞前炎症因子ＩＬ一６ 和ＴＮＦ一０ｔ的表达，特别是相关信号途径的研究则甚 少报道。 ＬＰＳ是炎症反应强有力的刺激物，本实验以 ＬＰＳ刺激为对照，主要观察ＣＲＰ直接刺激血管内皮 细胞后ＴＮＦ—ａ和ＩＬ一６的表达，以及细胞核内ＮＦ—ＫＢ 的激活状况。实验还将观察普伐他汀对ＣＲＰ诱导 反应的干预效果。 １材料与方法 １．１主要材料Ｇ反应蛋白（ＣＲＰ）购自Ｓｉｇｍａ公司。 ＬＰＳ购自Ｒ＆Ｄ公司，ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基和人胎牛血 清购自ＧＩＢｃＯ公司。普伐他汀原药由施贵宝公司友 情提供。ＴＮＦ－￣、ＩＬ－６酶联免疫吸附试剂盒（Ｒ＆Ｄ）； ［ 船Ｐ］ＡＴＰ（１１１０００ Ｇｑ／ｍｍｏｌ，北京亚辉生物医学工 程公司）；Ｇ２５层析柱（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）。 １．２方法 １．２．１ 细胞培养 人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ， ｆｒｏｍ Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ）用ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基培养 （内含１０ 热灭活的胎牛血清，１００ ｍｇ／Ｌ青霉素和 １００ ｍｇ／Ｌ链霉素以及内皮细胞生长因子，肝素等）。 第２—４代用于实验。细胞分种在２４孔板或９ ｃｍ圆 盘中，细胞融合成单层后，用无血清的培养基饥饿细 胞２４ ｈ后用于实验。 １．２．２ ＴＮＦ—ａ和ＩＬ一６水平检测 细胞培养于２４孔 板，不同浓度的ＣＲＰ（０，１，５，１０，２０，５０和１００ ｍｇ／Ｌ） 或ＬＰＳ（０，１，１０，２０，５０和１００￣ｇ／Ｌ）分别培养２４ ｈ，提取细胞培养液上清。用５０ ｍｇ／Ｌ ＣＲＰ或５Ｏ ｇ／ Ｌ ＬＰＳ按照不同时间（０，２，４，８，１６，２４和４８ ｈ）孵 育，提取细胞培养液上清。药物干预实验中，细胞预 培养液上清。培养液上清用以检测ＴＮＦ—ａ和ＩＬ一６ 水平，测定均采用商用ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ）检测试剂盒， 严格按照使用说明书进行操作。 １．２．３ ＥＭＳＡ检测ＮＦ—ＫＢ的活性 细胞核内的 ＮＦ— Ｂ蛋白质水平采用凝胶电泳迁移率方法检测 （ＥＭＳＡ）。细胞用ＣＲＰ（５０ ｍｇ／Ｌ）、ＬＰＳ（５０ ｕｇ／Ｌ）分 别刺激５ ｈ后提取细胞核蛋白。他汀类药物抑制实验 中细胞先用药物（１，５，１０ ｔｔｍｏｌ／Ｌ普伐他汀）分别孵 育１ ｈ后再用ＣＲＰ刺激５ｈ后提取细胞核蛋白。 参照Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ等＿６ 的方法提取核蛋白和标记 ＫＢ序列探针，收集５×１０ 细胞，冰ＰＢＳ洗涤，１ ５００ ｇ离心５ ｍｉｎ。细胞重悬于２００ ｕｌ冷裂解液Ａ １５ ｍｉｎ以裂解胞膜；加入１０ ＮＰ一４０溶液２５ ｌ，漩涡 混匀，６００ ｇ离心５ ｍｉｎ。所得胞核重悬于冷裂解液 ｃ，提取的核蛋白置～７０℃备用。含 Ｂ序列双链寡 核苷酸（ＮＦ．ＫＢ： ５，＿ＡＧＴＴＧＡＧＧＧＧＡＣＴＴＴＣ— ＣＣＡＧＧＣ一３ ，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）探针，在 Ｔ 寡核苷酸激酶作用下，以［７一。 Ｐ３ ＡＴＰ标记其５ 端，经Ｇ～２５层析柱纯化后，测定探针的放射性。 ＥＭＳＡ法检测ＮＦ－￣Ｂ活性及其特异性：取对照 组，ＬＰＳ刺激组和ＣＲＰ刺激组及药物干预组的核提取 物各３ ｇ与１ Ｉ标记探针混合，室温放置２０ ｍｉｎ，然 后在６ 非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳９０ ｍｉｎ，一７０ ｏＣ 放射自显影。显影电泳带通过激光扫描仪（Ｔｙｐｈｏｏｎ ９２００型，瑞典安玛西亚公司）扫描成像后用Ｉｍ— ａｇｅｑｕａｎｔ软件分析各带的相对放射性强度。凝胶迁 移率特异性竞争抑制实验：ＥＭＳＡ中设特异性竞争 抑制实验，ＬＰＳ刺激组和ＣＲＰ刺激组的核提取物各 ３ ｇ与标记探针１ Ｉ混合后，在反应体系中加入 １００倍未标记的特异性 Ｂ探针作特异性竞争。 １．３统计学处理 数据以 士Ｓ表示，多组问均数 比较用方差分析，采用ＳＰＳＳ ｕ．５软件进行处理。 ２ 结果 ２．１ ＣＲＰ和ＬＰＳ诱导ＨＵＶＥＣ合成ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－６ 的剂量效应ＣＲＰ刺激血管内皮细胞２４ ｈ后，细胞 维普资讯 http://www.cqvip.com ２００ 武汉大学学报（医学版） 第２９卷 培养液中ＴＮＦ—ａ和ＩＬ一６的水平随ＣＲＰ浓度的升高 而增加，呈剂量依赖性（表１）。ＩＬ一６的表达在５ ｒａｇ／ 和ＩＬ一６的生成达到最高。 ＬＰＳ刺激血管内皮细胞ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－６分泌也 ｕｇ／Ｌ ＬＰＳ时ＩＬ－６ Ｌ ＣＲＰ刺激时与对照组比较增加显著，Ｐ＜０．０５；与 呈明显的剂量依赖趋势（表２），５对照组比较，ＴＮＦ—ａ的表达在５ ｍｇ／Ｌ ＣＲＰ刺激时 水平较对照组增加，Ｐ＜０．０５；ＴＮＦ—ａ较对照组增 即有明显增加，Ｐ％０．０５；１００ ｍｇ／Ｌ ＣＲＰ时ＴＮＦ—ａ 加，Ｐ％０．０５。表１ ＣＲＰ剂量依赖性诱导ＨＵＶＥＣ分泌ＩＬ－６与ＴＮＦ＿ａ ±Ｓ，ｎ一７） Ｔａｂ．１ Ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－６ ａｎｄ ＴＮＦ－￣ｂｙ ＣＲＰ ｉｎ ＨＵＶＥＣｓ 表２ ＬＰＳ剂量依赖性诱导ＨＵＶＥＣ分泌ＩＬ－６与ＴＮＦ＿ａ ±Ｓ，ｎ一７） Ｔａｂ．２ Ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－６ ａｎｄ ＴＮＦ－￣ｂｙ ＬＰＳ（ｐｇ／Ｌ）ｉｎ ＨＵＶＥＣｓ Ｐ＜Ｏ．０５， Ｐ＜０．０１，ｖｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（０ ｒａｇ／Ｌ ＣＲＰ） ２．２ ＣＲＰ和ＬＰＳ诱导ＨＵＶＥＣ合成ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－６ 的时间曲线 ＣＲＰ（５０ ｍｇ／Ｌ）与ＬＰＳ（５０￣ｇ／Ｌ）刺 ３，４）。从表中可见，在ＣＲＰ刺激下，ＴＮＦ—ａ和ＩＬ一６ 比较即有统计学意义；随着时间的延长而逐渐增加， ２４ ｈ达峰值。ＬＰＳ刺激４ ｈ时两种炎症因子的表达 ２４ ｈ时ＴＮＦ—ａ和ＩＬ一６表达达到最高，４８ ｈ时仍有 激下ＨＵＶＥＣ时间依赖性分泌ＴＮＦ—ａ和ＩＬ一６（见表 亦有显著增加，与对照组比较，Ｐ＜０．０５，ＬＰＳ刺激 在２ ｈ即可检测到表达增加，４ ｈ表达水平与对照组 较高表达。表３ ＣＲＰ时间依赖性诱导ＨＵＶＥＣ分泌ＩＬ－６与ＴＮＦ＿ａ（ ±ｓ，ｎ一７） Ｔａｂ．３ Ｔｉｍｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ一６ ａｎｄ ＴＮＦ－￣ｂｙ ＣＲＰ ｉｎ ＨＵＶＥＣｓ 表４ ＬＰＳ时间依赖性诱导ＨＵＶＥＣ分泌ＩＬ－６与ＴＮＦ＿ａ ±Ｓ，ｎ一７） Ｔａｂ．４ Ｔｉｍｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ－６ ａｎｄ ＴＮＦ－￣ｂｙ ＬＰＳ ｉｎ ＨＵＶＥＣｓ ＰＧ０．０５， ＰＧ０．０１，ｖｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（０ ｈ） ｔｇ／ｍ１）对血管内皮细胞ＮＦ—ＫＢ活性的影 ２．３普伐他汀抑制ＣＲＰ诱导的ＨＵＶＥＣ合成ＴＮＦ－ ＬＰＳ（５０￣结果ＣＲＰ和ＬＰＳ均能诱导内皮细胞ＮＦ—ＫＢ激 ａ和ＩＬ一６ 如表５所示，普伐他汀以剂量依赖方式 响，（１，５，１０ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ）降低５０ ｍｇ／Ｌ ＣＲＰ诱导的ＴＮＦ—ａ 活，ＬＰＳ刺激强度高于ＣＲＰ。加入１００倍非标记探 ｔｉｖｅ）后均能抑制电泳滞后带的产生，证 和ＩＬ－６的表达。１０ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ普伐他汀可使ＴＮＦ—ａ 针（ｃｏｍｐｅｔｉ水平下降４０ ，Ｐ％０．０５；ＩＬ－６下降３４ ，Ｐ％０．０５。 实ＥＭＳＡ检测的特异性（见图１）。药物干预实验结 ２．４普伐他汀抑制ＣＲＰ诱导的ＨＵＶＥＣ ＮＦ－ＫＢ激 果如图１所示，ＣＲＰ诱导的ＮＦ—ＫＢ活性能被普伐他 活 特异性竞争抑制实验比较ＣＲＰ（５０ ｒａｇ／Ｌ）和 汀（１．０，５．０，１０ ｍｏｌ／Ｌ）不同程度降低。 表５普伐他汀抑制ＣＲＰ诱导的ＨＵＶＥＣ分泌ＴＮＦ－￣和ＩＬ－６（ｘ￣ｓ，ｎ一７） Ｔａｂ．５ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ ｏｎ ＴＮＦ－￣ａｎｄ ＩＬ－６ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｆｒｏｍ ＨＵＶＥＣｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＣＲＰ 维普资讯 http://www.cqvip.com
第２期 王海蓉，等．普伐他汀抑制ｃ一反应蛋白诱导的ＨＵＶＥＣ细胞合成ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－６ ２０１ ｆｒｅｅｐｒｏｂｅ ＬＰＳ 一…－－一一一． ＣＲＰ － 一 一 十 ＋ 一 ＋ 十 ＋ ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ－一＋一 ・・－一－ ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ－－一－一 －－ｌ ０ ５．０ ＩＯ 图１普伐他汀抑制ＣＲＰ诱导的ＨＵＶＥＣ ＮＦ－￣：Ｂ激活 Ｆｉｇ．１ Ｐｒａｖａｓｔａｔｉｔｒｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｎ ＮＦ－ＫＢ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＣＲＰ ３讨论 结果显示，ＣＲＰ以剂量依赖方式（１－１００ ｍｇ／Ｌ） 诱导ＨＵＶＥＣｓ分泌ＴＮＦ—ａ和ＩＬ一６，类似于ＬＰＳ在 （１－１００ ｕｇ／Ｌ）剂量范围诱导ＨＵＶＥＣ分泌这两种前 炎症因子。尽管在对应剂量范围ＬＰＳ显示出的刺 激效应更强，ＣＲＰ效力较弱，但５ ｍｇ／Ｌ ＣＲＰ已足以 引起血管内皮细胞的功能变化，即表现出一定的促 炎症效应，且随剂量增加效应增强，１００ ｍｇ／Ｌ时达 最大效应。研究进一步证实，在ＣＲＰ的促炎症效应 中ＮＦ— Ｂ信号途径被激活。普伐他汀（１，５，１０ ｔ￣ｍｏｌ／Ｌ）抑制ＣＲＰ诱导的血管内皮细胞ＴＮＦ—ａ和 ＩＬ一６分泌作用逐渐增强，并抑制了ＮＦ— Ｂ激活。 ＣＲＰ的直接促动脉粥样硬化作用一直备受争 论。在冠心病病人血循环中ＩＬ－６水平是增加的＿７］。 ＩＬ一６又是肝脏产生ＣＲＰ的最主要决定因素。ＣＲＰ 诱导内皮细胞分泌ＩＬ一６，ＩＬ－６的增加势必导致肝脏 产生更多的ＣＲＰ，形成恶性循环，导致血管内皮功能 的进一步恶化。ＴＮＦ—ａ也能诱导ＩＬ一６的生成，促进 白细胞与内皮细胞的黏附。而且，ＴＮＦ—ａ还能影响 脂质代谢，参与心血管疾病的发生过程 ］。ＣＲＰ诱 导内皮细胞ＴＮＦ—ａ表达，这些均支持ＣＲＰ的直接 促炎症效应以及参与ＡＳ形成的理论。转录因子 ＮＦ— Ｂ参与众多与ＡＳ有关的炎症因子基因表达的 调控，参与ＡＳ的病理发生机制 ］。ＣＲＰ诱导ＴＮＦ— ａ和ＩＬ一６生成过程中ＮＦ— Ｂ途径被激活。 普伐他汀抑制ＣＲＰ诱导的血管内皮细胞ＴＮＦ－ａ 和ＩＬ－６表达以及ＮＦ－￣：Ｂ活化，可以减轻内膜的炎症 反应，这是普伐他汀有利于预防ＡＳ的机制之一＿ｉ 。 口服后普伐他汀在血清中的峰浓度大约为１０ ｍｏｌ／ Ｌ，我们推测临床浓度可能也抑制内皮ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－６的 释放，并抑制ＮＦ－￣：Ｂ促进ＡＳ斑块的稳定性。ＣＲＰ在 炎症／动脉粥样硬化过程中发挥直接作用，针对ＣＲＰ 的药物治疗为临床提供了一个新的视角。ＣＲＰ激活 ＮＦ－￣：Ｂ信号途径并诱导炎症因子表达，尽管刺激强度 较ＬＰＳ明显较弱。普伐他汀不同程度降低ＣＲＰ诱导 的炎症因子表达和ＮＦ－￣：Ｂ激活。 参考文献 ［１］Ｌｉｂｂｙ Ｐ，Ｒｉｄｋｅｒ ＰＭ，Ｍａｓｅｒｉ Ａ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００２，１０５：１ １３５— １ １４３． Ｅ２］Ｒｉｄｋｅｒ ＰＭ，Ｃｕｓｈｍａｎ Ｍ，Ｓｔａｍｐｆｅｒ ＭＪ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｆｌａｍ— ｍａｔｉｏｎ。ａｓｐｉｒｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ａｐｐａｒｅｎｔｌｙ ｈｅａｌｔｈｙ ｍｅｎＥＪ］．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，１９９７， ３３６：９７３—９７９． ［３］Ｙａｍａｄａ Ｓ，Ｇｏｔｏｈ Ｔ，Ｎａｋａｓｈｉｍａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ａ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ： Ｊｉｃｈｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ Ｃｏｈｏｒｔ ＳｔｕｄｙＥＪ］．Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉ— ｏｌ，２００１，１５３（１２）：１ １８３—１ １９０． ［４］Ｐａｓｃｅｒｉ Ｖ，Ｗｉｌｌｅｒｓｏｎ ＪＴ，Ｙｅｈ ＥＴ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｒｅｃｔ ｐｒｏｉｎ— ｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｎ ｈｕｍａｎ ａｎ— ｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］。Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２０００，１０２：２ １６５—２ １６８． ［５］Ｐａｓｃｅｒｉ Ｖ，Ｃｈｅｎｇ ＪＳ，Ｗｉｌｌｅｒｓｏｎ ＪＴ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃ— ｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ－１ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａｎｔｉ—ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｄｒｕｇｓＥＪ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００１，１０３： ２ ５３１—２ ５３４． ［６］Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ Ｅ，Ｍａｔｔｈｉａｓ Ｐ，Ｍｕｌｌｅｒ ＭＭ，ｅｔ ａ１．Ｒａｐｉｄ ｄｅ— ｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｃｔａｍｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｍｉｎｉ—ｅｘｔｒａｃｔｓ，ｐｒｅ— ｐａｒｅｄ ｆｒｏｍ ａ ｓｍａｌｌ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒａｓ，１９８９；１７：６ ４１９． ［７］Ｄｕ Ｃｌｏｓ Ｔｗ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ—ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｍｅｄ，２０００，３２：２７４－２７８． ［８］ Ｒｏｓｓ Ｒ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］． Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，１９９９，３４０，１１５—１２６． ［９］Ｏｇａｔａ Ｎ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｈ，Ｋｕｇｉｙａｍａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｖｏｌｖｅ— ｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ ｉｎ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ－ｋａｐｐａ Ｂ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅ— ｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ，２０００，４５：５１３—５２３． ［Ｉｏ］Ｒｉｄｋｅｒ ＰＭ，Ｒｉｆａｉ Ｎ，Ｐｆｅｆｆｅｒ ＭＡ，ｅｔ ａ１．Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ ｏｎ ｐｌａｓｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ￣ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏ— ｔｅｉｎ．Ｔｈｅ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ａｎｄ Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｖｅｎｔｓ（ＣＡＲＥ）Ｉｎ— ｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９９９，１００：２３０—２３５． （２００７—０６—２６收稿） 编辑张峻
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