[12]发明专利申请公布说明书
[21]申请号200510087912.8
[51]Int.CI.
C12P 19/34 (2006.01)
[43]公开日2007年1月31日[22]申请日2005.07.29[21]申请号200510087912.8
[71]申请人中国检验检疫科学研究院食品安全
研究所
地址100025北京市朝阳区高碑店北路甲3号[72]发明人陈颖 钱增敏 王晶 王媛 吴亚君 徐宝
梁
[11]公开号CN 1904060A
[74]专利代理机构隆天国际知识产权代理有限公司
代理人高龙鑫 王颖
权利要求书 2 页 说明书 11 页 附图 2 页
[54]发明名称
一种从化妆品中提取DNA的方法
[57]摘要
本发明公开了一种从化妆品中提取DNA的方法。该方法通过往化妆品样品中加入核酸裂解液、甲醇水溶液或四氢呋喃醇水溶液及蛋白酶，充分研磨混合物至液状或稀糊状，然后使其温浴，抽提蛋白等杂质，将上清液沉淀，干燥沉淀物，然后加入去离子水溶解沉淀。本发明建立的化妆品中提取DNA的方法能够有效提取出多种性状的化妆品中的DNA，适用范围广、简便快速、特异性强、效率高，所提DNA适合在检测化妆品中所含成分的PCR扩增中作为模板。
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权 利 要 求 书
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1.一种从化妆品中提取DNA的方法，包括如下步骤：
1)取膏状或固体的化妆品样品放入研钵中，或取液体化妆品样品放入管中，加入1-3倍体积的pH8.0-8.5的核酸裂解液，1-3倍于化妆品体积的甲醇水溶液或四氢呋喃醇水溶液，并加入蛋白酶至终浓度为0.1-1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液状或稀糊状；其中，甲醇水溶液为甲醇∶水＝(60-80)∶(20-40)，四氢呋喃醇水溶液为甲醇∶四氢呋喃∶水＝(36-60)∶(75-125)∶(60-100)，上述比例均为体积比；
2)置60℃～65℃温箱中温浴，使其充分溶解混匀后冷却至室温； 3)将步骤2)的溶液用等体积的氯仿-异戊醇溶液抽提蛋白等杂质，吸取上清液；
4)用异丙醇或无水乙醇沉淀；
5)洗涤得到的沉淀物，然后干燥沉淀； 6)加入去离子水溶解沉淀。
2.根据权利要求1所述的从化妆品中提取DNA的方法，其特征在于，步骤1)中的核酸裂解液为10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/LNa2EDTA和2％SDS，pH值为8.0-8.5。
3.根据权利要求1所述的从化妆品中提取DNA的方法，其特征在于，步骤1)中的甲醇水溶液为甲醇∶水＝(70-60)∶(30-40)。
4.根据权利要求3所述的从化妆品中提取DNA的方法，其特征在于，步骤1)中的甲醇水溶液为甲醇∶水＝70∶30。
5.根据权利要求1所述的从化妆品中提取DNA的方法，其特征在于，步骤1)中的四氢呋喃醇水溶液为甲醇∶四氢呋喃∶水＝(50-60)∶(1 00-125)∶(80-100)。
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6.根据权利要求1所述的从化妆品中提取DNA的方法，其特征在于，步骤1)中的四氢呋喃醇水溶液为甲醇∶四氢呋喃∶水＝60∶125∶100。 7.根据权利要求1所述的从化妆品中提取DNA的方法，其特征在于，步骤1)中的蛋白酶为蛋白酶K、链霉蛋白酶、胃蛋白酶或蛋白酶BP。 8.根据权利要求1所述的从化妆品中提取DNA的方法，其特征在于，在步骤2)之后进一步加入1/3-1/5体积的5-7.5mol/L的NH4Ac或KAc溶液，剧烈震荡30-60s，放置冰上5-10min中。
，室温下离心，吸取澄清的液体至一新管3
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说 明 书
一种从化妆品中提取DNA的方法
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技术领域
本发明涉及一种提取DNA的方法，特别涉及一种从化妆品中提取用于化妆品中所含成分检测的模板DNA的方法。 背景技术
可传播性海绵状脑病(Transmissible spongiform encephalopathies，TSE)是一类侵袭人类及多种动物中枢神经系统的退行性脑病，潜伏期长，100％致死率，并可在同种动物间传播。自1730年首次报道羊搔痒病以来，目前已经在人类以及20余种动物中发现有自然发生或感染的TSE，其中包括人类的克-雅氏病(Creutzfeldt-Jacob disease，CJD)、FFI(fatal familial insomnia)、Kuru、GSS(Gerstmann-Straussler-Scheinker)以及动物的羊scrapie、牛的BSE、骡和麋鹿的CWD、貂的TME、猫的FSE等。
具有美白、祛斑、抗皱、抗衰老作用的化妆品中大多含有从牛、羊的脑及神经组织、内脏、胎盘和血液中提取的成分，如果制成这些成分的原料来自于感染BSE的临床前期的牛，或是组织在取材时遭到了污染，或是加工过程中不能够很好地灭活感染因子，那么这些污染了BSE感染因子的化妆品在长期的使用中理论上仍具有危险性。
为防止疯牛病通过化妆品传入我国，保障我国人民身体健康和生命安全，我国颁布了一系列法律条文禁止进口和销售含有发生“疯牛病”国家或地区牛、羊的脑及神经组织、内脏、胎盘和血液(含提取物)等动物源性原料成份(简称“牛羊动物源性原料成份”)的化妆品。
虽然目前国际国内均没有检测化妆品中牛羊动物源性原料成份的方法，但采用分子生物学手段检测化妆品中的牛羊源性成分从理论上讲是较为行之有效的方法。而使用分子生物学手段检测化妆品中的牛羊源性成分首先需要从化妆品中提取出适合检测的DNA作为PCR反应的模板。但由于化妆品特殊的加工工艺和复杂的成分组份，使DNA的提取在质量和数量上都具有相当的难度。目前常规的DNA提取方法因提取效率、提取质量等原因均不能
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满足于化妆品中DNA提取的要求，因此，研究开发针对化妆品中DNA提取的方法是利用分子生物学手段检测化妆品牛羊源性成分的关键所在。 发明内容
本发明的目的在于提供一种从化妆品中提取DNA的方法，该方法能从多种性状的化妆品中有效提取DNA，为分子生物学手段进行化妆品中牛羊源性成分的检测提供了基础。
化妆品种类众多、性状多样，有液状、膏状及固态等不同性状的样品。本发明建立的化妆品中提取DNA的方法能够有效提取出多种性状的化妆品中的DNA，适用范围广、简便快速、特异性强、效率高，所提DNA适合于化妆品中牛羊源性成分的PCR检测。
本发明的目的是这样实现的：一种从化妆品中提取DNA的方法，包括如下步骤：
1)取膏状或固体的化妆品样品放入研钵中，或取液体化妆品样品放入管中，加入约1-3倍体积的pH 8.0-8.5的核酸裂解液，约1-3倍于化妆品体积的甲醇水溶液或四氢呋喃醇水溶液，并加入蛋白酶至终浓度约为0.1-1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液状或稀糊状；其中，甲醇水溶液为甲醇∶水＝(60-80)∶(20-40)，四氢呋喃醇水溶液为甲醇∶四氢呋喃∶水＝(36-60)∶(75-125)∶(60-100)，上述比例均为体积比；
2)置60℃～65℃温箱中温浴，使其充分溶解混匀后冷却至室温； 3)将步骤2)的溶液用等体积的氯仿∶异戊醇溶液提取DNA，吸取上清液；
4)用异丙醇或无水己醇沉淀；
5)洗涤得到的沉淀物，然后干燥沉淀； 6)加入去离子水溶解沉淀；
在本发明的实施方式中，步骤1)中的核酸裂解液可以是本领域常规的核酸裂解液，优选为10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/L Na2EDTA
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和2％ SDS，pH8.0-8.5。
在本发明另一优选实施方式中，步骤1)中的甲醇水溶液为甲醇∶水＝(70-60)∶(30-40)；更优选为甲醇∶水＝70∶30。
在本发明另一优选实施方式中，步骤1)中的四氢呋喃醇水溶液为甲醇∶四氢呋喃∶水＝(50-60)∶(100-125)∶(80-100)；更优选为甲醇∶四氢呋喃∶水＝60∶125∶100。
本发明方法中，所述的蛋白酶用于降解化妆品中的蛋白质，该蛋白酶优选蛋白酶K、链霉蛋白酶、胃蛋白酶或蛋白酶BP，更优选为蛋白酶K(proteinaseK)。
进一步优选在步骤2)之后加入步骤2)所得溶液1/3-1/5体积的5-7.5mol/L的NH4Ac或KAc溶液，剧烈震荡30-60s，放置冰上5-10min，室温下离心，吸取澄清的液体至一新管中。
采用PCR扩增来检测本发明上述的方法是否从化妆品中提取到了DNA。 线粒体DNA细胞色素b基因(Cytb)是在动物中广泛存在的基因(Avise JC，1986，Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci.312(1154)：325-42)，而叶绿体核酮糖1，5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基基因(rbcL)是在植物中广泛存在的基因(Nadot S，et al.，1995，Mol Phylogenet Evol.4(3)：257-82)，通常采用检测这两个基因的存在与否来证明样品中是否含有动植物成分。本发明人根据位于这两个基因片段的中间区域序列来设计引物，经PCR扩增，如果PCR得到了相应的扩增片段，则说明本发明的DNA提取方法能从化妆品中有效提取DNA。
PCR扩增使用引物、反应体系及扩增条件如表1，2，3所述。 表1 动、植物成分PCR扩增引物序列
引物名称
检测基因
引物序列
F：5’-CTTGATTTTACCAAAGATGATGA-3’
Anm138
Cytb
R：5’-TTCTTCGCATGTACCCGCAG-3’
F：5’-CCATGAGGACAAATATCATTCTGAGG-3’
Plant159
rbcL
R：5’-GGCGAAAAATCGGGTGAGGG-3’
159138
扩增长度(bp)
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表2 PCR扩增反应体系
试剂名称10×PCR缓冲液dNTPs引物
Taq DNA聚合酶模板DNAddHO
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贮备液浓度加入PCR反应体系的体积(μl)54各10.31-5
补足至总体积为50μl
2.5mmol/L5μmol/L5U/μl
0.1～1.0μg/μl
表3 PCR扩增反应条件
预变性
扩增94℃ 30s
54℃ 30s72℃ 30s
循环次数
延伸
94℃ 3min3072℃ 5min
附图说明
图1A醇水溶液法提取的化妆品DNA植物成分的PCR扩增结果
其中：1.分子量Marker；2.阳性对照(大豆DNA)；3.美加净人参防皱霜；4.空白对照
图1B醇水溶液法提取的化妆品DNA动物成分的PCR扩增结果
其中：1.分子量Marker；2.阳性对照(牛肉DNA)；3.美加净人参防皱霜；4.空白对照
图2A呋喃醇水溶液法提取的化妆品DNA植物成分的PCR扩增结果
其中：1.分子量Marker；2.阳性对照(大豆DNA)；3.山莓草本精华洗发露；4.空白对照
图2B呋喃醇水溶液法提取的化妆品DNA动物成分的PCR扩增结果
其中：1.分子量Marker；2.阳性对照(牛肉DNA)；3.山莓草本精华洗发露；4.空白对照
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具体实施方式 实施例1：
1)称取1g美加净人参防皱霜放入干净的研钵中，加入3倍化妆品体积的pH 8.2的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/LNa2EDTA，2％ SDS)，3倍于化妆品体积的甲醇水溶液(70∶30)及5mg/ml蛋白酶K至终浓度为0.5mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液状或稀糊状，确保其内无块状物质。
2)置65℃温箱中温浴2h，期间每隔10min轻轻颠倒混匀数一次，确保其充分溶解混匀。
3)取出冷却至室温。加入1/3体积的5mol/L NH4Ac溶液，剧烈震荡30s，冰上放置10min，室温下12000rpm离心10min，吸取较澄清的水相至一新的Eppendorf管中。
4)加入与步骤3)所得的液体等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)溶液，振荡混匀，室温下12000rpm离心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
5)加入体积量是上述步骤4)所得液体2.5倍的冰预冷的无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃静置过夜。室温下12000rpm，离心20min，弃上清，留沉淀。
6)加入500μl冰预冷的70％乙醇洗涤沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清，除去残留的乙醇，干燥沉淀。
7)加入50μl去离子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
取10μl上述方法获得的DNA溶液进行植物成分的扩增检测。采用引物Plant159进行PCR扩增，反应体系及反应条件见表2和3。扩增产物进行电泳分析，见图1A。阳性对照采用Wizrad Genomic DNA Purification试剂盒(Promega公司)方法提取的大豆DNA，经引物Plant159在相同反应体系和条件下进行PCR扩增。空白对照为采用引物Plant159进行相同反应体系和条件的PCR扩增，但是以双蒸水作为加入的模板。电泳结果显示，本发明的DNA提取方法能从化妆品中有效地提取出植物源性DNA。
取10μl上述方法获得的DNA溶液进行动物成分的扩增检测。采用引物
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Anm138进行PCR扩增，反应体系及反应条件见表2和3。扩增产物进行电泳分析，见图1B。阳性对照采用Wizrad Genomic DNA Purification试剂盒(Promega公司)方法提取的牛肉DNA，经引物Anm138进行相同反应体系和条件的PCR扩增。空白对照为采用引物Anm138进行相同反应体系和条件的PCR扩增，但是以双蒸水作为加入的模板。电泳结果显示，本发明的DNA提取方法能从化妆品中有效地提取出动物源性DNA。 实施例2：
1)量取1.2ml液体山莓草本精华洗发露(取样前摇匀)放入两个Eppendorf管中，分别加入1倍体积的pH 8.0的核酸裂解液(2％(w/v)CTAB，100mmol/LTris-HCl(pH8.0)，1.4mol/L NaCl，20mmol/L Na2EDTA)，1倍体积的四氢呋喃溶液(甲醇∶四氢呋喃∶水＝60∶125∶100)和1/10体积的链霉蛋白酶(5mg/ml)至酶终浓度为1mg/ml，充分混匀。
2)置60℃温箱中温浴1h，期间每隔10min轻轻颠倒混匀数一次，确保其充分混合。
3)加入与步骤2)所得的液体等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)溶液，振荡混匀，室温下12000rpm离心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入0.8倍体积冰预冷的异丙醇，上下颠倒混匀后4℃静置过夜。室温下12000rpm，离心20min，弃上清，留沉淀。
5)加入500μl冰预冷的70％乙醇洗涤沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清，除去残留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入30μl去离子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
取10μl上述方法获得的DNA溶液进行植物成分的扩增检测。采用引物Plant159进行PCR扩增，反应体系及反应条件见表2和3。扩增产物进行电泳分析，见图2A。阳性对照采用Wizrad Genomic DNA Purification试剂盒(Promega公司)方法提取的大豆DNA，经引物Plant159进行相同反应体系和条件的PCR扩增。空白对照为采用引物Plant159进行相同反应体系和条件的PCR扩增，但是以双蒸水作为加入的模板。电泳结果显示，本发明的DNA
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提取方法能从化妆品中有效地提取出植物源性DNA。
取10μl上述方法获得的DNA溶液进行动物成分的扩增检测。采用引物Anm138进行PCR扩增，反应体系及反应条件见表2和3。扩增产物进行电泳分析，见图2B。阳性对照采用Wizrad Genomic DNA Purification试剂盒(Promega公司)方法提取的牛肉DNA，经引物Anm138进行相同反应体系和条件的PCR扩增。空白对照为采用引物Anm138进行相同反应体系和条件的PCR扩增，但是以双蒸水作为加入的模板。电泳结果显示，本发明的DNA提取方法能从化妆品中有效地提取出动物源性DNA。 实施例3：
1)称取1g胶状茶树油洗面奶放入干净的研钵中，加入2倍体积的pH 8.5的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/L Na2EDTA，2％ SDS)，2倍体积的四氢呋喃溶液(甲醇∶四氢呋喃∶水＝36∶80∶95)及5mg/ml的胃蛋白酶至酶的终浓度为0.1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液状或稀糊状，确保其内无块状物质。
2)置65℃温箱中温浴1.5h，期间每隔10min轻轻颠倒混匀数一次，确保其充分溶解混匀。
3)取出冷却至室温。加入1/5体积的7.5mol/L KAc溶液，震荡60s，冰上放置5min，室温下12000rpm离心10min，吸取较澄清的水相至一新的Eppendorf管中。 4)同实施例1。
5)加入2倍体积冰预冷的无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃静置过夜。室温下12000rpm，离心20min，弃上清，留沉淀。 6)同实施例1。
7)加入20μl去离子水溶解沉淀，4℃保存。
PCR检测，证明了上述方法能有效提取出洗面奶中的DNA成分。 实施例4：
1)称取1g美润护手霜放入干净的研钵中，加入3倍于护手霜体积的pH
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8.5的核酸裂解液(2％(w/v)CTAB，100mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，1.4mol/LNaCl，20mmol/L Na2EDTA)，3倍体积的四氢呋喃溶液(甲醇∶四氢呋喃∶水＝40∶125∶60)及5mg/ml的蛋白酶BP至酶的终浓度为0.3mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液状或稀糊状，确保其内无块状物质。
2)置62℃温箱中温浴1h，期间每隔10min轻轻颠倒混匀数一次，确保其充分溶解混匀。
3)加入与步骤2)所得的液体等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)溶液，振荡混匀，室温下12000rpm离心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入2倍体积冰预冷的无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃静置过夜。室温下12000rpm，离心20min，弃上清，留沉淀。
5)加入500μl冰预冷的70％乙醇洗涤沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清，除去残留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入20μl去离子水溶解沉淀，4℃保存。
PCR检测，证明了上述方法能有效提取出护手霜中的DNA成分。 实施例5：
1)称取2ml牛奶沐浴露放入Eppendorf管中，加入2倍牛奶沐浴露体积的pH 8.2的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/LNa2EDTA，2％ SDS)，2倍于牛奶沐浴露体积的甲醇水溶液(甲醇∶水＝60∶40)及5mg/ml的蛋白酶K至酶的终浓度为1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液状或稀糊状。
2)置60℃温箱中温浴2h，期间每隔10min轻轻颠倒混匀数一次，确保其充分溶解混匀。
3)取出冷却至室温。加入1/3体积的6mol/L KAc溶液，剧烈震荡30s，冰上放置10min，室温下12000rpm离心10min，吸取较澄清的水相至一新的Eppendorf管中。
4)加入与步骤3)所得的液体等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)溶液，振荡混匀，室温下12000rpm离心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
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5)加入等体积冰预冷的异丙醇，上下颠倒混匀后4℃静置过夜。室温下12000rpm，离心20min，弃上清，留沉淀。
6)加入500μl冰预冷的70％乙醇洗涤沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清，除去残留的乙醇，干燥沉淀。
7)加入50μl去离子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
PCR检测，证明了上述方法能有效提取出牛奶沐浴露中的DNA成分。 实施例6：
1)称取1g的绵羊酯日霜放入Eppendorf管中，加入2倍化妆品体积的pH 8.2的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/LNa2EDTA，2％ SDS)，2倍化妆品体积的甲醇水溶液(甲醇∶水＝80∶20)及5mg/ml的蛋白酶K至酶的终浓度为1mg/ml，充分研磨直至完全溶解成液状或稀糊状，确保其内无块状物质。
2)置60℃温箱中温浴2h，期间每隔10min轻轻颠倒混匀数一次，确保其充分溶解混匀。
3)加入与步骤2)所得的液体等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)溶液，振荡混匀，室温下12000rpm离心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入0.8倍体积冰预冷的异丙醇，上下颠倒混匀后4℃静置过夜。室温下12000rpm，离心20min，弃上清，留沉淀。
5)加入500μl冰预冷的70％乙醇洗涤沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清，除去残留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入50μl去离子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
PCR检测，证明了上述方法能有效提取出绵羊酯日霜中的DNA成分。 实施例7：
1)称取1g美润护手霜放入干净的研钵中，加入3倍于护手霜体积的pH8.5的核酸裂解液(2％(w/v)CTAB，100mmol/L Tris-HCl(pH8.0)，1.4mol/LNaCl，20mmol/L Na2EDTA)，2倍体积的四氢呋喃溶液(甲醇∶四氢呋喃∶水＝36∶125∶100)及5mg/ml的蛋白酶BP至酶的终浓度为0.3mg/ml，充分研磨
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直至完全溶解成液状或稀糊状，确保其内无块状物质。
2)置62℃温箱中温浴1h，期间每隔10min轻轻颠倒混匀数一次，确保其充分溶解混匀。
3)加入与步骤2)所得的液体等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)溶液，振荡混匀，室温下12000rpm离心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入2倍体积冰预冷的无水乙醇，上下颠倒混匀后-20℃静置过夜。室温下12000rpm，离心20min，弃上清，留沉淀。
5)加入500μl冰预冷的70％乙醇洗涤沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清，除去残留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入20μl去离子水溶解沉淀，4℃保存。
PCR检测，证明了上述方法能有效提取出护手霜中的DNA成分。 实施例8：
1)量取1.2ml液体山莓草本精华洗发露(取样前摇匀)放入两个Eppendorf管中，分别加入1倍体积的pH 8.0的核酸裂解液(10mmol/L Tris-HCl，400mmol/L NaCl，2mmol/L Na2EDTA，2％ SDS)，1倍体积的四氢呋喃溶液(甲醇∶四氢呋喃∶水＝60∶75∶60)和蛋白酶K(5mg/ml)至酶终浓度为1mg/ml，充分混匀。
2)置60℃温箱中温浴1h，期间每隔10min轻轻颠倒混匀数一次，确保其充分混合。
3)加入与步骤2)所得的液体等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)溶液，振荡混匀，室温下12000rpm离心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
4)加入0.8倍体积冰预冷的异丙醇，上下颠倒混匀后4℃静置过夜。室温下12000rpm，离心20min，弃上清，留沉淀。
5)加入500μl冰预冷的70％乙醇洗涤沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清，除去残留的乙醇，干燥沉淀。
6)加入30μl去离子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
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PCR检测，证明了上述方法能有效提取出洗发露中的DNA成分。 实施例9：
1)量取1.2ml液体山莓草本精华洗发露(取样前摇匀)放入两个Eppendorf管中，分别加入1倍体积的pH 8.0的核酸裂解液(2％(w/v)CTAB，100mmol/LTris-HCl(pH8.0)，1.4mol/L NaCl，20mmol/L Na2EDTA)，1倍体积的四氢呋喃溶液(甲醇∶四氢呋喃∶水＝60∶75∶98)和链霉蛋白酶(5mg/ml)至酶终浓度为1mg/ml，充分混匀。
2)置60℃温箱中温浴1h，期间每隔10min轻轻颠倒混匀数一次，确保其充分混合。
3)取出冷却至室温。加入1/5体积的7.5mol/L KAc溶液，震荡60s，冰上放置5min，室温下12000rpm离心10min，吸取较澄清的水相至一新的Eppendorf管中。
4)加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1)溶液，振荡混匀，室温下12000rpm离心10min，小心吸取上清液至一新的1.5ml Eppendorf管中。
5)加入0.8倍体积冰预冷的异丙醇，上下颠倒混匀后4℃静置过夜。室温下12000rpm，离心20min，弃上清，留沉淀。
6)加入500μl冰预冷的70％乙醇洗涤沉淀，室温下12000rpm离心10min，弃上清，除去残留的乙醇，干燥沉淀。
7)加入20μl去离子水溶解沉淀，得到含DNA的溶液。
PCR检测，证明了上述方法能有效提取出洗发露中的DNA成分。
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说 明 书 附 图
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