食品微生物学检验__大肠菌群_MPN_计数法

 记录人： 实验日期： 名 称 依 据 适 用 范 围 原 理 B 名 称 1 恒温培养箱 3 无菌吸管 4 无菌锥形瓶 5 无菌培养皿 6 菌落计数器 型 号 36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 1 ml（具 0.01 ml 刻度）、10 ml（具 0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸头。 容量 250 ml、500 ml。 直径 90 mm。 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管 10 ml。121 ℃高压灭菌 15 min。 注：用月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，称取35.6 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10 ml，121 ℃高压灭菌15 min。双料LST肉汤除蒸馏水外，其他原料加倍。 将蛋白胨、乳糖溶于约500 ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 ml（将20.0 g脱水牛胆粉溶于200 ml蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 ml，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 ml，用蒸馏水补足到1 000 ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 ml。121 ℃高压灭菌15 min。 注：用煌绿乳糖胆盐肉汤，称取40 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10 ml，121 ℃高压灭菌15 min。 称取8.5ｇ氯化钠溶于1 000 ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。 食品微生物学检验 大肠菌群 MPN 计数法 GB 4789.3—2010食品安全国家标准 食品中大肠菌群的计数 最可能数（ most probable number，MPN） ：基于泊松分布的一种间接计数方法。 规 格 2 均质器或振荡器 仪 器 设 备 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g 氯化钠 5.0 g 月桂基硫酸盐胰乳糖 5.0 g 蛋白胨（Lauryl 磷酸氢二钾(KHPO) 2.75 g 7 Sulfate 磷酸二氢钾(KHPO) 2.75 g Tryptose，LST）月桂基硫酸钠 0.1 g 肉汤 蒸馏水 1 000 ml pH 6.8±0.2 2424蛋白胨 10.0 g 煌绿乳糖胆盐乳糖 10.0 g （Brilliant 牛胆粉（oxgall或oxbile）溶8 Green Lactose 液 200 ml Bile，BGLB）肉0.1%煌绿水溶液13.3 ml 汤 蒸馏水 800 ml pH 7.2±0.1 无菌生理盐水 9 磷酸盐缓冲液 氯化钠 8.5 g 蒸馏水 1 000 ml 贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 ml蒸馏水中，用大约175 ml的1 mol/L磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0 g 氢氧化钠溶液调节，用蒸馏水稀释至1 000 ml后贮存于冰箱。 蒸馏水 500 ml 稀释液：取贮存液1.25 ml，用蒸馏水稀释至1 000 ml，分装于适宜容器中，121 ℃pH 7.2 高压灭菌15 min。 1 / 2

10 D 1 mol/L NaOH 1 mol/L HCl 类 别 NaOH 40.0 g 蒸馏水 1 000 ml HCl 90 ml 蒸馏水 1 000 ml 称取40 g氢氧化钠溶于1 000 ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。 移取浓盐酸90 ml，用蒸馏水稀释至1 000 ml，121 ℃高压灭菌15 min。 步 骤 1 样品的稀释 25 g(ml)样品+225 ml 稀释液，均质（1～2 min）。 （注：样品匀液pH值应在 6.5～7.5 之间，必要时用 1 mol/L 的NaOH或HCl 调节。） 10倍系列稀释。每递增稀释一次，换用 1 次1 ml 无菌吸管或吸头。（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面） （注：从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min） 选择3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种3管LST肉汤管，每管接种1ml（＞1 ml，用双料LST肉汤），36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验， 如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。 未产气者为大肠菌群阴性。 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环， 移种BGLB管中， 36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h，观察产气情况。 产气者，计为大肠菌群阳性管。 按D3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录B），报告每g（ml）样品中大肠菌群的MPN值。 参数 测 定 步 骤 2 初发酵试验 3 复发酵试验 大肠菌群最可4 能数（MPN）的报告 E 计 算 公 式 公式 备 注

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