注：所有的离心操作在室温中进行 一般操作设备：
1、 完全乙醇（96~100%）
2、 无菌的移液枪头和1.5ml的离心管
3、 可选：14.3Mβ-mercaptoethanol (β-ME, 2-mercaptoethanol) 4、 14000Xg的微型离心机 5、 加入70%乙醇的DPEC水 6、 一次性手套
二 、样品破坏和均化设备 1、 omega均化柱 2、 注射器具 3、 研钵和碾槌
4、 转子定子均化器 三、实验前准备：
可选：每一毫升TRK Lysis Buffer加入20ul的2-mercaptoethanol)制成工作溶液。混合液可在室温下保存一个星期。
1、hibind柱最大能收集100ug的RNA
2、TRK Lysis Buffer能操作的最大细胞数为1X10^7
Source Number of Cells RNA Yield (μg) IC21 1 x 106 12 Hela 1 x 106 15 293HEK 1 x 106 10 HIN3T3 1 x 106 15
四、收集细胞 1、收集悬浮细胞:
细胞数数，500g离心5分钟沉淀细胞，吸掉上清，继续下一步 2，收集单层细胞
（1） 直接溶解细胞：
细胞数数，吸掉全部的完全培养基，继续下一步
（2） 胰蛋白酶消化收集细胞
细胞数数，吸掉培养基，PBS洗几遍。用加了0.1~0.25%的胰蛋白酶的PBS消化细胞，当细胞从培养皿分离，加入培养基终止消化。500g离心5分钟，吸掉上清，继续下一步。
五、用TPK Lysis Buffter 破坏细胞
1对于细胞团，摇晃收集管使细胞团松散，按下表加入适量的TRK Lysis Buffer,振荡混匀。 细胞数量 <5X10^6
TRK Lysis Buffter(ul) 350 5X10^6~1X10^7 700 2、对于在培养板上的单层细胞，按下表加入适量的TRK Lysis Buffer,，用rubber policeman 收集细胞并转移至1.5ml的离心管中，振荡或吹打混合。 六、按以下其中一种方法匀浆化和破坏组织
1、Rotor-Stator 匀浆机：用匀浆机使样品完全均匀。
2、注射器和针头：把溶解产物通过针头5到10次，来把高分子量DNA剪切掉。
3、Omega匀浆柱（HCR003）:把溶解产物移至已嵌入收集管的柱子中，微型离心机以最大速度离心2分钟，收集匀浆化产物
七、加入等量的70%乙醇到溶解产物，上下吹打3到5次
八、把样品（包括第七步形成的沉淀）移至一个已嵌入2毫升的收集管的HiBind RNA柱中，室温10，0,00Xg离心60秒，弃掉液体。
九、加入500ul Wash Buffer I，室温10，0,00Xg离心60秒，弃掉液体。
十、加入500μl of RNA Wash Buffer II，室温10，0,00Xg离心60秒，弃掉液体
十一、加入500μl of RNA Wash Buffer II，室温10，0,00Xg离心60秒，将柱子放入新的2ml收集管
十二，最大速度离心
十三，RNA提取，将柱子放入1.5ml的离心管中，加入40-70μl of DEPC-treated water，最大速度离心1分钟。 、
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