抗坏血酸含量测定试剂盒说明书
抗坏血酸含量测定试剂盒说明书
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品内容：
提取液：液体120ml×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体6ml×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体5ml×1瓶，4℃保存； 试剂三：液体6ml×1 瓶，4℃保存；
标准品：粉剂10mg×1 瓶（避光），4℃保存。（称取1mg加入10ml提取液，即为100μg/ml标准品）
试验中所需的仪器和试剂：
研钵、冰、低温离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。
产品说明：
AsA。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用， 也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。
抗坏血酸具有较强还原能力将Fe3+还原成Fe2+，邻二氮菲与Fe2+会形成红色螯合物，在534nm处具
有强的吸收法，且吸光值与反应液中抗坏血酸含量呈正比。
操作步骤：
一、样品的前处理：
(1)组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10的比例（建议称取约 0.1g组织， 加入1ml提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
(2)细菌、真菌：按照细胞数量（10个）：提取液体积（ul）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；8000g，4℃离心 20min，取上清液置冰上混匀待测。
(3)血清等液体：按照样本体积（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1ml 样本，加入1ml提取液）进行混匀。8000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
二、测定操作表：
3.标准曲线的绘制及样本测定（按顺序加入下列试剂）
0μg/ml
15μg/ml
30μg/ml
60μg/ml
80μg/ml
100μg/ml
测定管
标准品（μl）
0
6
12
24
32
40
0
样本（μl）
0
0
0
0
0
0
40
提取液（μl）
40
34
28
16
8
0
0
试剂一（μl）
50
50
50
50
50
50
50
混合、摇匀
试剂二（μl）
25
25
25
25
25
25
25
试剂三（μl）
50
50
50
50
50
50
50
蒸馏水（μl）
50
50
50
50
50
50
50
充分混匀，室温静置 15min后，534nm处测定各管吸光值。如底部有沉淀，离心后再读数三、抗坏血酸含量计算
根据标准曲线，将样品△A带入公式中（x），计算出样品浓度 y（μg/mL）。1.按蛋白浓度计算
抗坏血酸（μg / mg prot）=y×V样÷（V样×Cpr） 2.按样本鲜重计算
抗坏血酸（μg /g 鲜重）= y×V样÷(V样÷V样总×W) 3.按细胞数量计算
抗坏血酸（μg /106cell）= y×V样÷(V样÷V样总×细胞数量) 4.按体积计算
抗坏血酸（μg /ml）=10y
V 样总：上清液总体积，mL；V 样：加入反应体系中上清液体积；W：样品质量，g；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；细胞数量：以 106 为单位计量；T：样本稀释倍数。
注意事项：
1、样品处理需匀浆完全，抗坏血酸易分解，需避光保存
2、标准品：现配现用。
3、若不确定样品中 抗坏血酸 含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。
4、因为提取液中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。