骨皮质剥离术联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究

・２１９４・　吉林医学２０１５年５月第３６卷第１１期　骨皮质剥离术联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验　研究　刘胜平（广东省韶关市粤北人民医院骨三科，广东韶关５１２０２６）　［摘要］　目的：观察分析骨皮质剥离术联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究。方法：将２５只实验兔子作　为研究对象，并建立骨不连模型，采用随机数字表法将实验兔子分为两组，其中对照组采用传统的骨皮质剥离术治疗措施，试验组采　用骨皮质剥离术联合自体骨髓问充质干细胞移植的治疗措施，观察并比较两组兔子经过治疗后的临床效果。结果：经对比观察，试　验组采用骨皮质剥离术联合自体骨髓间充质干细胞移植的治疗方法兔子骨不连间隙宽度变化情况明显优于对照组，差异有统计学　意义（Ｐ＜０．０５）。此外，骨缺损区骨痂形成量与骨不连间隙宽度相符合。试验组患者经过治疗后骨不连的愈合率（１００％）明显高于　对照组骨不连的愈合率（７５．００％），差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论：骨皮质剥离术联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨不　连，促进骨缺损区骨痂的形成，提高骨不连愈合率，骨不连恢复情况明显优于传统方法，应该在临床上大量应用。　［关键词］　骨皮质剥离术；联合自体骨髓间充质干细胞移植；骨不连；实验研究　骨折不愈合称之为骨不连。一般来说，骨组织有良好的愈　合能力，大多数骨折患者的骨折部位在进行治疗后都会愈合。　但人与人之间体质、营养等因素的不同会影响骨折的愈合速　度。在所有骨折患者中有约６％的患者愈合及其困难，骨折不　形成情况。观察并比较两组兔子的临床疗效。　１．３疗效评定标准：经过治疗１０周，比较两组兔子骨不连间　隙宽度变化和骨不连的愈合情况。骨不连愈合标准：固定物取　除后，活动骨折部位无任何疼痛感，无任何并发症。　愈合使患者活动时有剧烈疼痛感，严重影响生活质量。传统的　治疗骨不连的方法是骨皮质剥离术。为临床探寻治疗疾病的　新技术，本文在实验兔进行骨皮质剥离术联合自体骨髓问充质　干细胞移植试验，特选取２５只实验兔作为研究对象，对其分析　后，现报告如下。　１资料与方法　１．４统计学处理：统计分析时采用ＳＰＳＳ１７．０软件分析，计量　资料以均数４－标准差（　４－ｓ）表示，用　检验计数资料，用ｔ检　验比较组问，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　２结果　２．１　两组兔子骨不连间隙宽度治疗前后变化情况的比较：经　对比观察，试验组采用骨皮质剥离术联合自体骨髓间充质干细　胞移植的治疗方法兔子骨不连间隙宽度变化情况明显优于对　照组，差异有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。此外，骨缺损区骨痂形成　１．１　一般资料：随机选取２５只实验兔子作为研究对象，其中　雌性兔子１３只，雄性兔子１２只，年龄２—４个月，平均３个月。　兔子体重２．５～３．５　，平均３　ｋｇ。试验组１３只兔子，其中雌性　兔子７只，雄胜兔子６只，年龄２－４个月，平均（３．２７±０．８２）个　月；体重２．５～３．４　ｋｇ，平均（３．１１　４－０．９７）　。对照组１２只兔　量与骨不连间隙宽度相符合。见表１。　表１两组兔子骨不连间隙宽度治疗前后变化情况的比较（　±ｓ，ｍｍ）　子，其中雌性兔子６只，雄性兔子６只，年龄２—４个月，平均　（３．２６　－０．８４）个月；体重２．５～３．４５　ｋｇ，平均（３．０９±０．９６）ｋｇ。　这些兔子均有我院动物实验室提供，采用相同饲料喂养，所以　兔子活动正常，无感染疾病，适合实验，差异无统计学意义（Ｐ＞　０．０５），具有可比性。　注：与对照组比较，①Ｐ＜Ｏ．０５　１．２方法：将２５只实验兔子作为研究对象，并建立骨不连模　型，经ｘ线确定为骨不连。对照组兔子采用传统的骨皮质剥离　术的治疗方法。试验组兔子采用骨皮质剥离术联合自体骨髓　２．２　两组兔子经治疗后的骨不连愈合情况：经对比观察，试验　组患者经过治疗后骨不连的愈合率（１００％）明显高于对照组骨　不连的愈合率（７５．００％），差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。此　外，试验组兔子骨细胞和间充质细胞增生良好，骨小梁数目明　显增多。见表２。　表２两组兔子经治疗后的骨不连愈合情况　间充质干细胞移植的治疗方法，在传统的骨皮质剥离术的基础　上，将兔子麻醉后置于兔子手术台上固定，制作骨不连模型。　在无菌条件下应用ｌ８号骨穿针从股骨远端内侧穿刺抽取骨髓　间充质干细胞进行培养，然后进行自体骨髓问充质干细胞移植　治疗骨不连。治疗后２、６、１０周反复进行ｘ线检查（仪器为　ＦＣＲ５０００计算机ｘ线摄影系统，由日本生产），扫描后在计算机　上精密计算治疗前后骨折间隙的平均宽度及骨缺损区骨痂的　生成量。然后将兔子处死，并在兔子死前２周和死后１周连续　３　ｄ注射四环素（生产厂家武汉博士德生物工程有限公司），取　骨折间隙组织染色观察患者成骨细胞、骨小梁的数量和排列的　注：与对照组比较，①Ｐ＜０．０５　吉林医学２０１５年５月第３６卷第１１期　・２１９５・　３讨论　综上所述，骨皮质剥离术联合自体骨髓间充质干细胞移植　经对比观察，试验组采用骨皮质剥离术联合自体骨髓间充　治疗骨不连，促进骨缺损区骨痂的形成，提高骨不连愈合率，患　者骨不连恢复情况明显优于传统方法，应该在临床上大量应　用。　质干细胞移植的治疗方法兔子骨不连间隙宽度变化情况明显　优于对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。此外，骨缺损区骨　痂形成量与骨不连间隙宽度相符合。骨不连即骨折不愈合，一　般情况下，在经过适当治疗后骨折均能痊愈，而对于一少部分　患者在骨折后骨折难以愈合，每每活动骨折部位都会有疼痛　感，这给患者的日常生活带来很大不便，严重影响生活质量。　传统的骨皮质剥离术能够治疗患者骨不连的情况，然而在经骨　皮质剥离术后患者的恢复时间长达３一ｌ２个月之久。本研究　对兔子自体进行自体骨髓问充质干细胞移植术实验，实验证明　兔子骨缺损区骨痂形成量与骨不连问隙宽度相对于，应用骨皮　４参考文献　［１］王旭明，邢更彦，韩新明．体外冲击波结合自体５一ＢｒｄＵ　标记骨髓间充质干细胞移植治疗骨不连的实验研究［Ｊ］．生物　骨科材料与临床研究，２０１０，７（３）：１．　［２］　付新生，蒋攀峰．髂骨瓣联合自体骨髓间充质干细胞移　植治疗早期股骨头坏死［Ｊ］．中国骨与关节外科，２０１２，５（２）：　１７２．　质剥离术联合自体骨髓问充质干细胞移植的兔子，骨痂形成更　多，促进兔子骨不连愈合　。随着自体骨髓间充质干细胞移　植的日臻完善，给骨不连患者带来了福音。　经骨皮质剥离术联合自体骨髓间充质干细胞移植治疗骨　不连后，试验组兔子经过治疗后骨不连的愈合率（１００％）明显　高于对照组骨不连的愈合率（７５．０Ｏ％），统计学上有意义（Ｐ＜　［３］谭勇海，姜苗苗，于海勇，等．关节镜清理联合自体骨髓　间充质干细胞移植治疗膝骨关节炎的疗效观察［Ｊ］．中医正骨，　２０１３，２５（１０）：３５．　［４］欧阳石，刘树人，程１７（３６）：６４５５．　涛，等．自体骨髓间充质干细胞肝　动脉移植治疗失代偿期肝硬化［Ｊ］．中国组织工程研究，２０１３，　［５］王楠，刘伟，周晔，等．髓芯减压植骨术联合脐带　０．０５）。本研究显示，对于实验兔子骨折后骨不连情况的治疗　上，传统的骨皮质剥离术在治愈兔子的骨不连方面存在一定的　缺陷，治愈率较低，在采用骨皮质剥离术联合自体骨髓间充质　干细胞移植来治疗骨不连进行治疗后，弥补了传统方法在治疗　间充质干细胞移植治疗股骨头坏死的疗效［Ｊ］．中国老年学杂　志，２ｏ１３，３３（２３）：５８６２．　［６］王军，王晓峰，张荣军．自体骨髓间充质干细胞治疗脑　干出血４１例临床分析［Ｊ］．中国实用神经疾病杂志，２０１３，１６　（２３）：２０．　上的诸多不足　Ｊ。临床有资料显示，伴有较大骨缺损的骨不　连患者仅采用骨皮质剥离术是难以痊愈的，这时进行骨皮质剥　离术联合自体骨髓问充质干细胞移植是及其必要的。　［收稿日期：２０１４—１１—１１编校：王丽娜］　ＵＶＢ诱导下脂肪干细胞的抗衰老机制　朱美抒［摘（广东省深圳市第二人民医院烧伤整形科，广东深圳５１８０００）　要］　目的：探讨中波紫外线（ＵＶＢ）下脂肪干细胞的抗衰老作用及可能机制。方法：分离培养原代人脂肪干细胞（观察　组，ｎ＝１２）及人皮肤成纤维细胞（对照组，ｎ＝１２），均以４０　ｍＪ／ｅｒａ　ＵＶＢ单次照射诱导衰老，４８　ｈ后镜下观察衰老情况；分别于照射开　始即刻、照射１２　ｈ、２４　ｈ、４８　ｈ、７２　ｈ时行Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测细胞ＰＤＧＦＲａ蛋白、ＭＭＰ一２４蛋白的表达。结果：观察组细胞形态未　见明显变化；对照组呈现典型衰老形态。经ＵＶＢ照射后，观察组各时间点ＰＤＧＦＲ　ｏＩ蛋白表达明显高于对照组而ＭＭＰ一２４表达明　显低于对照组，上述差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５），且观察组上述指标虽时间延续变化不显著（Ｐ＞Ｏ．０５），但对照组变化显著（Ｐ＜　０．０５）。结论：脂肪干细胞能够抵抗ＵＶＢ的诱导衰老，其机制可能与抑制ＰＤＧＦＲ　蛋白的低表达与ＭＭＰ一２４蛋白的高表达有关。　［关键词］脂肪干细胞；基质金属蛋白酶；血小板衍生生长因子受体；中波紫外线　衰老为正常且不可逆转的生物学现象，延缓机体衰老为延长　人体寿命的重要手段。临床研究指出细胞增殖能力下降与衰老　的发生与发展显著相关，且脂肪干细胞分泌的细胞因子能够有效　促进成纤维细胞的细胞增生，发挥一定抗氧化及抗凋亡功能，从　博奥）、ＤＭＥＤ细胞培养基（武汉博士德）、２　Ｘ　ＳＤＳ蛋白裂解液　（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ）、Ｇｅｎｅｐｉｘ　４０００Ｂ激光扫描仪（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ）、紫　外交联仪（上海兰仪）等；人皮肤成纤维细胞及人脂肪干细胞均　由华中科技大学同济医学院提供。　１．２　实验方法：体外培养人皮肤成纤维细胞及人脂肪干细胞，　而实现抗衰老　。但其具体下游机制尚不明确。本研究试图通　过中波紫外线诱导脂肪干细胞与成纤维细胞衰老，检测其中多种　蛋白的表达，探讨脂肪干细胞的抗衰老机制，报告如下。　取第３代细胞开展实验。取成纤维细胞（对照组）及脂肪干细　胞（观察组），按１０６个／皿接种至直径１０　ｔｉｎ培养皿中，各组均　ｌ２个培养皿。利用紫外交联仪以４０　ｍＪ／ｅｒａ。剂量ＵＶＢ行单次　１资料与方法　照射以诱导衰老。照射４８ｈ后，每培养皿取细胞，按７００　４＂／ｅｍ　接种至９６孔板（每皿４孔），镜下观察细胞形态学变化。同时　１．１　实验材料：仪器与试剂生物素标记抗体芯片一１（广州瑞