高效液相色谱同时检测白酒中四大酸的方法

王芳;廖勤俭;安明哲;练顺才;李杨华;郭艳

【摘 要】建立了一种利用高效液相色谱仪同时检测乳酸、乙酸、丁酸、己酸的方法.本研究方法试验了两种样品,白酒酒尾和己酸发酵液.研究结果表明,4种酸的定量检测限均为10 mg/L,线性相关系数R2值为0.9996~0.9999,白酒酒尾样品中的回收率为94.3 %~100.5 %,检测结果的相对偏差(RSD)为1.29 %~3.67 %;己酸发酵液样品中的回收率为96.6 %~101.9 %,检测结果的相对偏差(RSD)为

1.28 %~3.02 %,满足分析要求.%In this study,a method of detecting lactic acid,acetic acid,butyric acid and hexanoic acid in Baijiu by high

performance liquid chromatography had been developed.Two samples including tail liquor and hexanoic acid fermenting liquid were used in the experiment.The research results suggested that, the quantitative detection limit of all four acids was 10 mg/L, the linear correlation coefficient (R2) was 0.9996 to 0.9999; the recovery rate of tail liquor samples was 94.3 % to 100.5 % and its RSD was 1.29 % to 3.67 %;the recovery rate of hexanoic acid fermenting liquid was 96.6 % to 101.9 % and its RSD was 1.28 % to 3.02 %.

【期刊名称】《酿酒科技》 【年(卷),期】2018(000)005 【总页数】3页(P114-116)

【关键词】高效液相色谱;白酒酒尾;己酸发酵液;乳酸;乙酸;丁酸;己酸

【作 者】王芳;廖勤俭;安明哲;练顺才;李杨华;郭艳

【作者单位】宜宾五粮液股份有限公司,四川宜宾644007;宜宾五粮液股份有限公司,四川宜宾644007;宜宾五粮液股份有限公司,四川宜宾644007;宜宾五粮液股份有限公司,四川宜宾644007;宜宾五粮液股份有限公司,四川宜宾644007;宜宾五粮液股份有限公司,四川宜宾644007 【正文语种】中 文

【中图分类】TS262.3;TS261.7;TS261.4

乳酸、乙酸、丁酸、己酸是浓香型白酒中四大主体酸酯，即乳酸乙酯、乙酸乙酯、丁酸乙酯、己酸乙酯的前体物质，也是白酒香味成分。因乳酸为高沸点不挥发性酸，长期以来，此四大酸均参考国标苄基溴酯化气相色谱检测方法[1]，此方法前处理时间长，影响检测效率。另有离子色谱法测此4种酸[2]，该方法的应用常出现乳酸和乙酸难以分离的问题，所以，针对白酒样品，常常会进行上百倍的稀释，从而加大了检测误差，出现样品检测结果不稳定的情况;也有以硫酸铜水溶液作为水相流动相，利用高效液相色谱法测定白酒中乳酸和乙酸的方法[3]。白酒企业中，常规的酸酯醇检测大多采用气相色谱法，因此，为缓解气相色谱的检测压力，以及离子色谱针对高酸浓度样品的检测不稳定性，笔者利用高效液相色谱进行了乳酸、乙酸、丁酸、己酸的检测方法研究，并验证了方法在白酒酒尾样品、己酸发酵液样品检测中的准确性，特别是己酸发酵液中4种酸的检测，可以监控发酵的稳定性及发酵过程的原料转化率及己酸产率。研究结果表明，该方法简便适用，精确度高，重复性好。 1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

酒样：白酒酒尾及己酸发酵液由本实验室自备。

乳酸、乙酸、丁酸、己酸标准品的配制：准确称取色谱级乳酸、乙酸、丁酸、己酸，以70%的甲醇水溶液分别配制成50 mL浓度为10 g/L的标准储备液放置于4℃中冷藏。

试剂：优级纯磷酸、超纯水、HPLC级甲醇。

仪器设备：美国Agilent公司1100高效液相色谱仪，DAD检测器。 1.2 实验方法 1.2.1 液相色谱条件

色谱柱：Agela公司VenusilASB C184.6×250 mm，5 μm。 柱温：30℃。

紫外线检测波长：214 nm。

流动相：A：甲醇；B：0.1%的磷酸水溶液。

梯度洗脱：0 min：100 B；8 min：100 B；25 min：10 B；28.5 min：10 B；29 min：100 B；35 min：100 B；停止：35 min；流速：1.0 mL/min。 1.2.2 样品前处理

白酒酒尾样品：取0.5 mL白酒样品以0.1%的磷酸水溶液稀释至1 mL，于2 mL离心管中，振荡均匀，0.2 μm的膜过滤后作为待测样品。

己酸发酵液：取0.1 mL己酸发酵液，以0.1%的磷酸水溶液稀释至1 mL，于2 mL离心管中，振荡均匀，0.2 μm的膜过滤后作为待测样品。 2 结果与分析 2.1 标样的检测

分别取10 g/L的4种酸单标准溶液，以0.1%的磷酸水溶液稀释至1000 mg/L的混合标准溶液，进行定性检测。标准品液相色谱图见图1，4种酸的出峰时间见表

1。

图1 标准品液相色谱图

表1 4种酸的出峰时间化合物乳酸乙酸丁酸己酸出峰时间(min)6.7 7.0 20.2 25.3 2.2 标准曲线及线性范围

分别取10 mg/L的4种酸单标准溶液，以0.1%的磷酸水溶液稀释至100 mg/L、500 mg/L、1000 mg/L、1500 mg/L、2000 mg/L，5个浓度梯度，作为定量分析校正。以峰面积Y为纵坐标，以质量浓度（mg/L）为X横坐标进行线性回归，检测结果见表2。

表2 标准曲线结果化合物乳酸乙酸丁酸己酸线性方程Y=0.4605x-2.7592 Y=0.3976x-2.0943 Y=0.4969x+2.97 Y=0.3595x+3.6828 R2 0.9996 0.9999 0.9998 0.9999检测限(mg/L)10 10 10 10 2.3 白酒酒尾样品中4种酸的精密度、回收率

取白酒酒尾样品，其中一份经1.2.2中方法处理后，作为空白样品；另两份分别加入已知量的4种酸单标准溶液，经1.2.2中方法处理后，进行回收率测定；同时对空白样品进行精密度测定，检测结果见表3。白酒酒尾空白样品色谱图见图2。 图2 白酒酒尾空白样品色谱图

2.4 己酸发酵液样品中4种酸的精密度、回收率

取己酸发酵液样品，其中一份经1.2.2中方法处理后，作为空白样品；另两份分别加入已知量的4种酸单标准溶液，经1.2.2中方法处理后，进行回收率测定；同时对一加标样品进行精密度测定，检测结果见表4。

表3 白酒酒尾样品中4种酸检测结果化合物乳酸本底值(mg/L)158.6 RSD(%)2.74乙酸128.51.75丁酸114.13.67己酸895.91.29加入量(mg/L)100 200 100 200 100 200 800 1000本底值与实测值之差(mg/L)100.5 197.8 94.3 198.2 94.3 192.8 801.6 989.5回收率(%)100.5 98.9 94.3 99.1 94.3 96.4 100.2 99.0

表4 己酸发酵液样品中4种酸检测结果化合物乳酸本底值(mg/L)0 RSD(%)1.28乙酸124.52.37丁酸307.73.02己酸1332.42.56加入量(mg/L)100 200 100 300 200 400 400 600本底值与实测值之差(mg/L)101.9 200.1 97.3 294.6 193.2 394.1 401.2 589.7回收率(%)101.9 100.0 97.3 98.2 96.6 98.5 100.3 98.3 3 结果与讨论

该方法中水相流动相中加入适量的磷酸有助于乳酸和乙酸的分离和保证样品检测的稳定性、准确性。方法中白酒酒尾样品，酒精度在15%vol左右，样品中乙醇的浓度对乙酸和乳酸的分离有影响，经磷酸水溶液稀释后，能保证样品中乳酸峰和乙酸峰的有效分离。己酸发酵液样品中乙酸、丁酸、己酸浓度相对较高，且含有一定的钙盐、钠盐，经磷酸水溶液进行十分之一的稀释，可以将溶液中的有机酸盐转化成酸，保证样品检测的准确性。

方法采用214 nm的DAD检测波长，梯度洗脱的方式,随着流动相中有机相浓度的增高，基线有一定的向上漂移，但对样品中4种酸的定性定量检测没有影响。 方法中，4种酸的定量检测限均为10 mg/L，线性相关系数R2值为0.9996～0.9999，白酒酒尾样品中的回收率为94.3%～100.5%，检测结果的RSD为1.29%～3.67%。己酸发酵液样品中的回收率为96.6%～101.9%，检测结果的RSD为1.28%～3.02%，满足分析要求。

该方法简单、适用，可以缓解白酒企业气相色谱和离子色谱的检测压力。 参考文献：

[1]中国轻工业联合会.食品添加剂乳酸：GB 2023—2003[S].北京：中国标准出版社,2003.

[2]郭逸臻,石敏.离子色谱法测定白酒中乳酸含量的方法研究[J].酿酒科技,2008(9)：108-110.

[3]冯向东.高效液相色谱法测定白酒中乳酸和乙酸含量[J].酿酒科技,2009(5)：115-

116.