裸花紫珠提取物凝血有效部位的研究
2021-05-27
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环球中医药2015年11月第8卷第11期Global Traditional Chinese Medicine,November 2015,Vo1.8,No.11 1359 ・论著・ 裸花紫珠提取物凝血有效部位的研究 张利 黄胜颜小捷杨子明 谷陟欣李典鹏 【摘要】 目的研究裸花紫珠提取物凝血作用及其有效部位。方法 以质控血浆为研究对 象,通过测定裸花紫珠粗提物及各分离部位和单体对凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、凝血酶 时间(thrombin time,TT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,Aerr)、血浆纤 维蛋白原(fibrinogen,FIB)四项指标观察其对凝血系统的影响。结果与溶媒对照比较.裸花紫珠 粗提物能明显缩短PT、APTT、TT的时间,能明显提高FIB含量;裸花紫珠40%甲醇洗脱部位能明显 缩短APTT、TT的时间,能明显提高FIB含量;与粗提物比较,40%甲醇洗脱部位效果最接近于粗提 物。结论裸花紫珠有较好的凝血效果,其有效部位可能在40%甲醇洗脱部位。 【关键词】裸花紫珠;有效部位;凝血;凝血酶原时间 【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1674—1749.2015.11.02l Effects ofactive fraction from Callicarpa nudiflora on blood coagulation system ZHANGLi,HUANG Sheng,YAN Xiao e,et a1. Guangxi Key Laboratory of Functional Phytochemicals Research and Utilization,Guangxi Institute of Botany,Chinese Academy of Sciences,Guilin 541006,China Corresponding author:LI Dian-peng,E—mail:Zdp@gxib.cn 【Abstract】0bjective To study the effect of active fraction from Callicarpa nudilfora on blood CO— agulation system.Methods The effect of active fraction from CaUicarpa nudilfora on blood coagulation system were observed with prothrombin time(PT),activated partial thromboplastin time(APTT),thrombin time(TT)and ifbrinogen(FIB)of the constituents blood samples were tested.Results Compared with the blank control,Callicarpa nudilorfa extract could signiifcantly lessen PT,TF,APITr,and could obviously increased the content of FIB;40%Methanol elution par could signiifcantly lessen TT,AP订,and could obviously increased the content of FIB.Conclusion The hemostatie effect of active fraction froln Callicarpa nudilofra may be 40%Methanol elution par of Callicarpa nudilorfa. 【Key words】 Callicarpa nudilfora;Hemostatic;Mice;Prothrombin time 裸花紫珠Callicarpa nudilfora Hook.et Am.为马 散瘀消肿之功效,主治急性传染性肝炎、化脓性炎症、 呼吸道及消化道出血、血小板减少性紫癜等症,外用 主要用于治疗烧伤、烫伤、风湿肿痛、跌打肿痛、外伤 出血、肺结核咳血、胃肠出血等症。是海南黎族医生常 用药材之一[2 ]。目前对裸花紫珠凝血有效部位、凝 鞭草科紫珠属植物,又名紫珠,主产于中国海南,是海 南的一种道地药材,在广东、广西也有分布…。国外 主要分布于越南、印度和马来西亚。其味苦、微辛,性 平,根、茎、叶皆可入药,有解毒、抗菌消炎、收敛止血、 基金项目:国家科技支撑计划(SQ2OIOBnJY1411-07-05);海南 省中药现代化专项(2012ZY020):广西植物研究所与九芝堂股份有 血机制研究均较少。有学者报道裸花紫珠总黄酮是其 凝血的主要有效成分[6]。为了探讨裸花紫珠凝血活 性的有效部位及凝血机理,本实验对裸花紫珠凝血作 用的主要潘陛部位进行了筛选研究,并初步探讨了其 凝血作用机理 1材料与方法 限公司横向合作项目;广西植物功能物质研究与利用重点实验室主 任基金项目(Z1LIJ2014-7) 作者单位:541006桂林.广西植物功能物质研究与利用重点实 验室广西植物研究所(张利、颜小捷、杨子明、李典鹏);九芝堂股份 有限公司(黄胜、谷陟欣);海南九芝堂药业有限公司(黄胜) 作者简介:张利(1983一),本科,助理实验师。研究方向:植物 活性物开发与利用研究。E—mail:345576619@qq.eOlll 通讯作者:李典鹏(1968一),博士,研究员。研究方向:植物活 性物开发与利用研究。E mail:ldp@gxib.c13 1.1药品和试剂 裸花紫珠粗提干浸膏粉末(由九芝堂药业海南 分公司提供);质控血浆(北京世帝,生产批号: 1360 环球中医药2015年11月第8卷第11期Global Traditional Chinese Medicine,November 2015,V 01.8,No.11 20130508)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)试 剂盒、凝血酶时间(thrombin time,TT)试剂盒、活化 部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)试剂盒、血浆纤维蛋白原(fibrinogen, FIB)凝血酶原时间(prothrombin time,PT)试剂盒、 均为北京世帝科学仪器公司生产:甲醇(西陇化工, 生产批号:121013)、二甲基亚砜(国药试剂,生产批 号:110506)等试剂均为分析纯。 1.2实验仪器 AT-200型电子天平(德国METTLER公司), LG.PABER凝血因子分析仪(北京世帝),QO型高速 离心机(珠海黑马),R 200型旋转蒸发仪(Buchi Labortechnik AG CH.9230),Agilentl 100分析型高效 液相色谱仪(美国Agilent公司)。 1.3有效部位和成分的提取分离 称取500 g裸花紫珠粗提干浸膏粉末,按质量 体积为比为1:20用适量去离子水完全溶解后先经 布袋过滤,后经棉花塞过滤;所得滤液上HP一20大 孔树脂,依次采用去离子水、5%甲醇、40%甲醇、 60%甲醇、80%甲醇洗脱,各梯度均洗脱至无颜色为 止,得大孔树脂未吸附部分、水洗脱部位、5%甲醇洗 脱部位、40%甲醇洗脱部位、60%甲醇洗脱部位、 80%甲醇洗脱部位;将上述各部分分别于旋转蒸发 仪50cC下减压浓缩得水洗脱部分浸膏、5%甲醇洗 脱部分浸膏、40%甲醇洗脱部分浸膏、60%甲醇洗脱 部分浸膏、80%甲醇洗脱部分浸膏。经HPLC分析, 大孔树脂未吸附部位和5%甲醇洗脱部位均包含于 水洗脱部位中,故将此三部分合并统称为水洗部 位。其中水洗脱部位回收率为66.02%,40%甲醇 洗脱部位回收率为19.22%,60%甲醇洗脱部位回 收率为8.50%,80%甲醇洗脱部位回收率为 3.50%。从裸花紫珠粗提干浸膏粉末分离得到连翘 酯苷B、原儿茶酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷4个 单体,其中连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷 主要从40%甲醇洗脱部分得到。 1.4裸花紫珠提取物对凝血系统的影响 将水洗部位、40%甲醇洗脱部位、60%甲醇洗脱 部位、80%甲醇洗脱部位4个活性部位;连翘酯苷 B、原儿茶酸、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷4个单体 化合物分别溶于20%的二甲基亚砜溶液中,以20% 的DMSO溶液为空白对照组,取质控血浆量与试验 药物溶液体积比为9:l,混匀。每种药物重复实验 3次,求其平均值。严格按LG—PABER半自动血小 板聚集凝血因子分析仪操作规程,依次测定各试验 药物P11、TF、AVI'T、FIB这4项血凝指标。血浆PT 缩短率(%)=(溶媒对照平均PI’一给药平均 )/溶 媒对照平均PTx100%;Tr缩短率(%)=(溶媒对照 平均1Tr一给药平均TT)/溶媒对照平均1_r×100%; APTT缩短率(%):(溶媒对照平均APTT一给药平 均AP1T)/溶媒对照平均APT-Fx 100%;FIB提高率 (%):(给药平均FIB含量一溶媒对照平均FIB含 量)/溶媒对照平均FIB含量×100%。 1.5统计学处理 采用SPSS 11.5统计软件进行数据分析,实验 数据均以( ±s)表示,两个独立样本均数比较采用t 检验,多个样本之间的比较采用单因素方差分析, 进一步两两比较采用LSD,P<0.05为差异具有统计 学意义 2结果 2.1裸花紫珠提取物对PT的影响 与溶媒对照比较,粗提物组,水洗脱部位、80% 甲醇洗脱部位2个部位,原儿茶酸、连翘酯苷B、毛 蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷4个单体的凝血酶原时间 (er)均明显缩短,有统计学意义;与粗提物(裸花紫 珠粗提干浸膏粉末)比较,40%甲醇洗脱部位的Prr 明显延长,有统计学意义。结果见表1。 表1裸花紫珠提取物对 的影响( ±s,n=3) 注:与溶媒对照比较, P<0.05, P<O.O1;与粗提物比较, P<0.01。 2.2裸花紫珠提取物对1Yr的影响 与溶媒对照比较。粗提物,水洗脱部位、40%甲 醇洗脱部位、60%甲醇洗脱部位3个部位,连翘酯苷 B、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷3个单体的凝血酶时 间(TF)均明显缩短,有统计学意义;与粗提物比较, 4个活性部位及4个单体的111明显延长,有统计学 环球中医药2015年11月第8卷第11期Global Traditional Chinese Medicine.November 2015.Vo1.8.No.11 136l 意义,其中40%甲醇洗脱部位最接近于粗提物。结 表4裸花紫珠提取物对FIB的影响( ± ,n=3) 果见表2。 表2裸花紫珠提取物对r丌的影响( ,n=3) 注:与溶媒对照比较, P<O.01;与粗提物比较, P<O.O1,。P<0.05。 2.3裸花紫珠提取物对AP37'的影响 与溶媒对照比较 粗提物活化部分凝血活酶时 间(AP1TI’)明显缩短,有统计学意义,水洗脱部位 APTF明显延长,有统计学意义;与粗提物比较,水 洗脱部位、40%甲醇洗脱部位、80%甲醇洗脱部位3 个部位,原儿茶酸、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、异毛蕊 花糖苷4个单体APTT明显延长,有统计学意义,其 中40%甲醇洗脱部位、60%甲醇洗脱部位最接近于 粗提物。结果见表3。 表3裸花紫珠提取物对APTI"的影响( ,n=3) 注:与溶媒对照比较, P<O.O1;与粗提物比较, P<0.05, P<O.O1。 2.4裸花紫珠提取物对FIB的影响 与溶媒对照比较,粗提物,40%甲醇洗脱部位1 个部位,连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷3 个单体的纤维蛋白原(FIB)均明显延长,有统计学 意义;与粗提物比较,60%甲醇洗脱部位、原儿茶酸 明显缩短,有统计学意义;其中40%甲醇洗脱部位 优于于粗提物。结果见表4。 注:与溶媒对照比较, P<O.05,“P<O.O1;与粗提物比较, P<O.05。 3讨论 目前市场上由裸花紫珠提取制成的制剂有裸 花紫珠胶囊、裸花紫珠颗粒、裸花紫珠片、灭滴消:炎 栓与复方木麻黄片等 引,这些制剂的药用原料仅 限于裸花紫珠浸膏或其水粗提物,颜色深,成分杂, 对裸花紫珠凝血活性部位及其化学成分未有明确 研究,也就是说迄今为止,尚不清楚裸花紫珠凝血 作用的化学物质基础,阻碍了裸花紫珠药用产品的 研制。凝血酶原时 能准确、有效地反映外源性 凝血系统,1Tr能有效地反映内源性凝血系统,APrIT 反映内、外源共同性凝血系统,FIB是通过对纤溶系 统的影响反映凝血效果 。 。。本实验通过测定其 P1’、1Tr、APTT、FIB四项指标观察裸花紫珠对凝血系 统的影响。结果发现裸花紫珠4个分离部位中,以 40%甲醇洗脱部位凝血效果最好,最接近于裸花紫 珠粗提物,说明裸花紫珠凝血有效部位可能在40% 甲醇洗脱部位。毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、连翘 酯苷B.这3个单体都有较好的凝血效果,而它们又 主要在40%甲醇洗脱部位.进一步确证裸花紫珠凝 血有效部位可能在40%醇洗脱部位,具体确切的有 效成分和作用机理还需深入研究。 参考文献 [1]徐国钧.中国药材学(上册)[M].北京:中国医药科技出版 社.1996:917. 『2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典 (一部)[S].北京:人民卫生出版社,1977:621. 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[8] 韦少成.海南省药品标准[M].海口:海南出版社,1993:(本文编辑:董历华) 不同血塞通胶囊的人参皂及三七皂苷溶出 度对比研究 张晴杜守颖 陆洋 白洁 李鹏跃滕会会杜秋 【摘要】 目的建立测定血塞通胶囊中人参皂苷Rg 、Re、RI).、Rd及三七皂苷R 溶出度的检 采用HPLC法检测5 测方法,并比较3种不同血塞通胶囊溶出度情况,为剂型改进提供依据。方法种皂苷的体外溶出度,计算并绘制累积溶出曲线,通过相似因子(f,)分别比较不同血塞通胶囊问5 种皂苷溶出度的差异及每种胶囊中各皂苷间的溶出度差异,并采用质量权重系数法将血塞通胶囊 中i七总皂苷组分的溶出曲线进行整合。结果维和硬胶囊和络泰软胶囊中5种皂苷在30分钟内 累积溶出率均达到60%以上,12小时内均达到85%以上,而理洫王软胶囊各成分成分30分钟累积 溶 率仅为3%,12小时内达到40%,3种血塞通胶囊间溶出曲线f1均小于50,各胶囊中5种皂苷间 f1均大于50。3种血塞通胶囊的溶出过程存在显著性差异,以油相为内容物基质的理洫王软胶囊相 对于维和硬胶囊及络泰软胶囊显示出缓释作用.5种皂苷间溶出行为无显著性差异,呈现出同步 性,与整合结果趋势相同。结论胶囊壳及内容物基质的不同对胶囊的溶出过程存在一定的影响, 油相基质具有缓释作用,血塞通胶囊中5种皂苷的溶 具有同步性。 【关键词】血塞通胶囊;缓释;多成分;质量权重系数法 【中图分类号】 R286【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1674—1749.2015.11.022 Comparison of dissolution of ginsenoside and notoginsenoside form different Xuesaitong capsules ZHANG Qing,DU Shou—ying,LU Yang,et a1.School ofChinese Medicin,Beijing University ofChinese Medicine,Beqing 100102,China. Corresponding author:DU Shou—Ying,E—mail:dushouying@263.net;Lu yn ,E—mail:Landocean28@ l63.com 【Abstract】0bjective To establish the methods for determining the dissolution of ginsenoside Rg1,Re,Rbl,Rd and notoginsenoside Rl in Xuesaitong capsuls,and study the dissolution condition of the three capsules,which can provide a basis for the improvement of dosage form.Methods HPLC and UV were used to detect the in vitro dissolution in the three capsules,respectively,cumulative dissolution curves were drawn and similar factors of the curves were compared.Furthermore,the muhieomponernt drug release enrves were integrated by using Weight coeieifent method.Results The dissolution of the five 基金项目:国家科技重大专项(2014ZX09301306-009):北京市科技新星计划(xx2015A048) 作者单位:100102北京中医药大学中药学院[张晴(硕士研究生)、杜守颖、陆洋、白洁、李鹏跃、滕会会(硕 士研究生)、杜秋(硕士研究生)1 作者简介:张晴(1991一),女,2013级在读硕士研究生。研究方向:中药新剂型与新技术研究。E—mail: zhangqing81 1@163.con 通讯作者:牡守颖(1960一),博士,教授,博士生导师。研究方向:中药新剂型与制剂关键技术研究。E.mail: dushouying@263.net;陆洋(1981一),博士,副教授,硕士生导师。研究方向:中药新剂型与制剂关键技术研究。 E—mail:landocean28@163.corn。杜守颖与陆洋并列为本文通讯作者