hVEGF165基因表达的调控作用
董红燕;张中明;闫英群
【期刊名称】《中国病理生理杂志》 【年(卷),期】2006(022)009
【摘 要】目的:探讨缺氧、复氧条件下,低氧反应元件(HRE)作为氧条件基因表达控制开关,对心肌细胞转染rAAV-HRE9-hVEGF165基因表达的调控作用.方法:分离新生SD大鼠心肌细胞,采用无血清培养,将在HEK293T细胞进行包装后获得的腺相关病毒转染培养的心肌细胞.实验共分为8组:Ⅰ组(空白对照组):常氧培养24 h(氧浓度21%);Ⅱ组(缺氧对照组):常氧培养16 h,缺氧8 h(氧浓度1%);Ⅲ组(转基因对照组):常氧培养24 h;Ⅳ组(转基因缺氧1组):转基因后缺氧8 h;Ⅴ组(复氧1组):常氧培养16 h,缺氧8 h、复氧4 h;Ⅵ组(复氧2组):常氧培养16 h,缺氧8 h、复氧8 h;Ⅶ组(复氧3组):常氧培养16 h,缺氧8 h、复氧12 h;Ⅷ组(转基因缺氧2组):转基因后常氧培养16 h,缺氧20 h.ELISA法测定培养液VEGF蛋白含量;细胞免疫荧光染色及RT-PCR分别检测细胞内VEGF蛋白及VEGF165 mRNA的表达.结果:95%的培养心肌细胞可见自律搏动,cTn-Ⅰ染色阳性率为86%;病毒转染率约为87%.Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ组培养液中VEGF蛋白含量显著高于其它各组(P＜0.01),细胞免疫荧光VEGF蛋白染色呈阳性;RT-PCR测定显示,Ⅳ、Ⅴ及Ⅷ组可见484 bp目的条带.结论:rAAV-HRE9-hVEGF165可成功地转染原代培养心肌细胞,在缺氧环境下,受HRE的调控,VEGF165 mRNA及VEGF165蛋白可有效表达,而在常氧状态下,目的基因的表达及蛋白合成即行中止. 【总页数】5页(P1712-1716)
【作 者】董红燕;张中明;闫英群
【作者单位】徐州医学院神经生物学研究中心,江苏,徐州,221002;徐州医学院附属医院胸心外科,江苏,徐州,221002;徐州医学院附属医院胸心外科,江苏,徐州,221002 【正文语种】中 文 【中图分类】R3 【相关文献】
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