加压提取三七总皂苷及其含量测定

Ｊ　Ｌｉ辽孝压学嚆学搪　２０１３　Ｏ　ｔ．３４（５）　ａｏｎｉｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　…　加压提取三七总皂苷及其含量测定　吴丽霞　，梁翠霞　，廖乐乐　，吴铁松　（１．深圳市龙华新区观澜人民医院药剂科；２．深圳流花医院药剂科，广东深圳５１８００２）　摘要：目的优化加压技术提取三七总皂苷的工艺参数。方法　以香草醛一高氯酸比色法测定三七总皂苷　含量；分别以渗漉法、醇回流法、超声波提取法、加压提取法提取三七总皂苷；以三七总皂苷得率为指标设计　正交试验，确定三七总皂苷的加压提取最佳工艺参数。结果　三七总皂苷加压提取得率高于渗漉法、醇回流法　和超声波提取法，综合优势明显；加压提取三七总皂苷的最佳提取条件：浸提压力为４．５　ｋｇ／ｃｍ２，粒径为４０目，　提取液为７０％乙醇，料液比为１：１０，提取时间为６０　ｒａｉｎ，温度为６０℃，该条件下总皂苷提取率可达９．１８％。　结论加压提取三七总皂苷具有工艺简便易行、得率高的优点，应用前景好。　中图分类号：Ｒ９３１　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７４—０４２４（２０１３）０５—００６０—０２　关键词：三七总皂苷；加压提取；含量测定　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐａｎａｘ　Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ　Ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｂｙ　Ｐｒｅｓｓｕｒｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ＷＵ　Ｌｉｘｉａ　，ＬＩＡＮＧ　Ｃｕｉｘｉａ　，ＬＩＡＯ　Ｌｅｌｅ　，ＷＵ　Ｔｉｅｓｏｎｇ　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｕａｎｌａｎ　Ｐｅｏｐｌｅ’Ｓ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ；　２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｕｈｕａ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ　５１８００２　Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｐａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ　ｓａｐｏｎｉｎｓ（ＰＮＳ）ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｐｒｅｓｓｕｒｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｖａｎｉｌｌｉｎ—ｐｅｒｅｈｌｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ＰＮＳ．Ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ　ａｓ　ｗｅｌｌ　ａｓ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｐｒｅｓｓｕｒｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｗｅｒｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ＰＮＳ　Ｏ￣ｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｙｉｅｌｄｓ　ｏｆ　ＰＮＳ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｕｒｐｏｓｅ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｆｏｒ　ｐｒｅｓｓｕｒｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ＰＮＳ　ｙｉｅｌｄｓ　ｏｆ　ｐｒｅｓｓｕｒｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ，ａｌｃｏｈｏｌ　ｒｅｆｌｕｘｉｎｇ　ａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｐｒｅｓｓｕｒｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｗｅｒｅ　ｏｂｖｉｏｕｓ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｗａｓ　４．５　ｋｇ／ｍ　；ｐａｒｔｉｃｌｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｗａｓ　４０　ｍｅｓｈ；ｅｘ—　ｔｒａｃｔｉｎｇ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　７０％ｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗａｓ　１：１０，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｄｕｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　６０　ｍｉｎｕｔｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　６０　ｏＣ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｉｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　Ｗａｓ　９．１８％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｉｔ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ＰＮＳ　ｂｙ　ｐｒｅｓｓｕｒｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｙｉｅｌｄ　ａｎｄ　ｂｒｏａｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ　ｓａｐｏｎｉｎ；ｐｒｅｓｓｕｒｉｚｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　三七（Ｒａｄｉｘ　Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎ）又名田七，属古热带残遗植　物，是我国珍贵的特产中药，主产于云南、广西等地。三　七入药历史悠久，具有散瘀止血、消肿定痛之功效。ｊ七　中总皂苷是＿一七主要药理活性成分　，现代医药研究表明　三七总皂苷具有捌血脂、降压、增加心脑血流量、抗肝纤　１材料与仪器　１．１药材三七块根，购自广州市医药公司。　１．２试剂三七皂苷Ｒｇｌ标准品由中国药品生物制品检定　所提供，批号：１２４６—９７０５；香草醛、冰醋酸、高氯酸、　乙醇、甲醇等均为分析纯。　１．３仪器电子天平（赛多利斯，型号：ＫＹ—ＧＳＡ１２４Ｓ）；　紫外可见分光光度计（北京普析通用，型号：ＴＵ一１８００）；　旋转蒸发仪（上海亚荣，型号：ＲＥ一３０００）；高速离心机　（江苏省金坛市环宇科学仪器厂，型号：ＹｘＪ一２）；数控超　声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，型号：ＫＱ一　维化、保护心肌、抗心律失常、抗休克、抗血栓、改善微　循环等多方面的药理活性。加压提取是一项新的提取技术，　近年应用于中药领域。在中药有效成分的提取过程中，施　加一定的压力，可使溶剂在高于沸点时仍保持液体状态，　改善溶剂的溶解性，同时，使药材的细胞壁破裂增多，有　效成分的溶出速率加快，药材有效成分的提取率明显增　加　。许多研究结果表明　，加压提取技术适用用于大　２２００ＤＢ）；高压磁力搅拌反应釜（烟台科立化Ｔ设备有限　公司，型号：ＰＣＦ一１）。　部分中药材，是具有广泛发展前途的中药有效成分提取新　工艺。本文采用香草醛一高氯酸比色法测定三七总皂苷含　２方法与结果　２．１三七总皂苷测定　量，以三七总皂苷得率为指标设计正交试验，确定其加压　提取法的最佳Ｔ艺参数。　２．１．１对照品溶液的制备精密称取２．４８　ｍｇ对照品三七　基金项目：深圳市宝安区２０１２年科技计划项目，项目编号：２０１２２７７。　作者简介：吴丽霞（１９７７），女，广东河源人，主管中药师，学士学位，主要研究方向为中药学。　吴丽霞，等：加压提取三七总皂苷及其含量测定　皂苷Ｒｇｌ，倒人２５　ｍＬ量瓶中，加甲醇液至刻度，充分溶解　即得对照品溶液（每ｍＬ含对照品三七皂苷０．０９９　２　ｍｇ）。　２．１．２供试品溶液的制备精密称取２４．８　ｍｇ精制三七总　皂苷样品，倒入２５　ｍＬ容量瓶中，加甲醇液至刻度，充分　溶解即得即得供试品溶液（每ｍＬ含样品０．９９２　ｍｇ）。　２．１．３检测波长的确定吸取标准液，按２．１．４项方法显　色，以紫外分光光度计扫描（８００　Ｄｍ～２００　Ｆｉｎ），最大吸收　波长（即检测波长）为５６０　１１１１３。　２．１．４标准曲线的制备　分别精密吸取对照品溶液０．５、　１．０、１．５、２．０、２．５、３．０　ｍＬ，倒入１０　ｍＬ试管，挥干溶剂　后加入０．２　ｍＬ　５％香草醛一冰醋酸溶液。取０．８　ｍＬ高氯酸　水浴加热（水浴温度６０℃），２０　ｍｉｎ后立即取出放入冷水　中冷却，加入５．０　ｍＬ冰醋酸，摇匀。相应试剂随行空白对　照，波长５６０／ｌｍ处测定吸收度Ａ，以三七皂苷Ｒｇｌ含量　（ｍｇ）为横坐标，吸收度为纵坐标，求回归方程为：Ｙ＝　５．２７０Ｘ＋０．０５１１，ｒ＝０．９９９　５。结果表明三七皂苷Ｒｇｌ在　０．０２４　２５～０．１２１　２５　ｍｇ之间有良好线性关系。　２．２三七总皂苷提取法　２．２．１回流法称取三七干燥粗粉２０　ｇ，加５０％乙醇（料　液比１：１０）回流提取，共２次，１小时／次，合并２次滤　液，浓缩，定容至５００　ｍＬ备用。　２．２．２渗漉法称取三七干燥粗粉２０　ｇ，加５０％的乙醇　（料液比１：１０）润湿１　ｈ后装柱，继续浸泡１２　ｈ后调整滤　速为１０　ｍＬ／ｍｉｎ过滤，浓缩滤液，定容至５００　ｍＬ备用。　２．２．３超声波提取法称取三七干燥粗粉２０　ｇ，加５０％乙　醇（料液比１：１０）超声提取，共２次，３０分钟／次，合并　滤液，浓缩，定容至５００　ｍＬ备用。　２．２．４加压提取法称取三七干燥粗粉２０　ｇ，置加压提取　器中，加５０％乙醇（料液比１：１０），于６０℃、４．５　ｋｇ／ｃｍ　压力下密封加压浸提１　ｈ，浓缩，定容至５００　ｍＬ备用。　４种提取法提取的三七总皂苷含量分别为：醇回流法　７．４５％、渗滤法７．８９％、超声波提取法７．９２％、加压提取　法８．０２％。加压提取法所得含量最高，醇回流法最低。渗　漉法和超声波提取法所得含量与加压提取法相当，但渗漉　法周期长，消耗溶剂多，超声波法不宜用于工业化生产，　经综合比较后，确定加压提取法作为三七总皂苷提取法。　２．３正交试验根据预试验，固定压力为４．５　ｋｇ／ｃｍ　，粒　径为４Ｏ目，选取乙醇浓度（Ａ）、固液比（Ｂ）、提取时间　（ｃ）、提取温度（Ｄ）为影响因素，每个因素设定３个水　平，以三七总皂苷提取得率为指标，按照Ｌ。（３　）正交表　进行试验，因素、水平见表１。　表１　Ｌ。（３　）正交因素水平表　极差分析结果显示，影响三七总皂苷提取率的主次因　素依次是Ｄ提取温度、Ｂ料液比、Ｃ提取时间、Ａ乙醇浓　度，最佳组合为Ａ　Ｂ　ｃ　Ｄ　，即最佳提取条件为：提取液为　７０％乙醇，料液比为１：１０，提取时间为６０　ｍｉｎ，温度为６０　℃。见表２。　２．４验证实验按优选方案安排实验，验证３批，三七总　皂苷的提取率分别为９．１４％、９．０７％、９．１８％，均高于正　交试验的提取率。　６１　表２　Ｌ　（３　）提取工艺条件正交试验结果　３讨　论　皂苷是极性较强的含糖基化合物，易溶于极性溶剂，化　学性质不稳定，在酶、酸性条件下易水解。目前，提取三七　中皂苷成分的方法有水煎煮法、醇回流法、大孔吸附树脂　法、微波提取法、超声提取法、超临界萃取等　。上述方法　虽然技术较为成熟，但存在一定的缺点：水煎煮法、醇回流　法存在流程长、提取率低的缺点，而且有机溶剂用量大，后　处理困难，污染环境；超声、微波提取法虽省时省力，但目　前处于实验室研究阶段，不适宜较大规模的工业化生产。　加压提取一项新兴的提取技术，具有提取时间短、溶　剂消耗少、提取效率高等优点，已广泛应用于中药材提取、　药物分析、食品、环境等领域。本研究以不同提取方法提　取三七总皂苷，结果加压提取法提取的三七总皂苷含量最　高，经过综合比较分析后，确定高压提取法提取三七总皂　苷优于渗滤法、醇回流法、超声波提取法。正交实验结果　表明，三七总皂苷高压高压提取的最佳工艺为：浸提压力　为４．５　ｋｇ／ｃｍ　，粒径为４０目，提取液为７０％乙醇，料液比　为１：１０，提取时间为６０　ｍｉｎ，温度为６０　ｏｃ。　香草醛一高氯酸比色法，测定三七总皂苷含量，方法　简便，污染少，但该法显色受温度、时间等环境因素影响　较大　。测定时，应注意控制加热温度和加热时间。当温　度高于６Ｏ℃长时间加热，糖类吸收干扰显著。总皂苷测定　以６０℃加热１５　ｒａｉｎ为宜。三七总皂苷显色在１　ｈ内稳定，　故显色后需在１　ｈ内测定。　参考文献：　［１］　甘雨，徐惠波，孙晓波．三七总皂苷的药理作用研究进展　［Ｊ］．时珍国医国药，２００７，１８（５）：１２５１—１２５２．　［２］　李鹏，李绍平，付超美，等．加压溶剂提取技术在中药质量　控制中的应用［Ｊ］．中国中药杂志，２００４，２９（８）：７２３—　７２６．　［３］　Ａｎｅｋｐａｎｋｕｌ　Ｔ，Ｇｏｔｏ　Ｍ，Ｓａｓａｋｉ　Ｍ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆａｎｔｉ—ｃａｎｃｅｒ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｆｒｏｍ　ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｍｏｒｉｎｄａ　ｃｉｔｒｉｆｏｌｉａ　ｂｙ　ｓｕｂｃｒｉｔｉｃａｌ　ｗａｔｅｒ　［Ｊ］．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，５５：３４３　３４９．　［４］　杨薇薇，张永忠，李成刚，等．加压提取红三叶草总异黄酮　的研究［Ｊ］．中草药，２００９，４０（９）：１４０６—１４０７．　［５］　黄凤，向飞军，伍杰雄．三七叶皂苷成分及其单体提取分离　研究进展［Ｊ］．中药材，２００９，３２（６）：９９９—１００５．　［６］　谢茵，邢桂琴，刘秀芬．三七提取液中三七总皂苷的分离纯　化工艺研究［Ｊ］．山西医科大学学报，２００６，３７（６）：６１３　—６１５．　收稿日期：２０１３—０７—０９